Allotransplantation in utero et immortalisation d’hépatocytes fœtaux de primates

Abstract

Reçu le 21 décembre 2000 RÉSUMÉ Nous développons des approches précliniques chez le primate comme modèle de thérapie cellulaire pour le traitement de maladies métaboliques hépatiques. Chez le foetus, les tissus, dont le foie, sont en expan sion, ce qui devrait faciliter la prise de greffe des hépatocytes, et le système immunitaire devient plei nement mature seulement après la naissance. Nous avons défini les conditions d'isolement d'hépatocytes foetaux de macaques à la fin du 2èm e trimestre de ges tation (90-100 jours), ainsi que les conditions de cul ture, de cryopreservation et de transduction rétrovi rale. Nous avons également évalué deux voies d'administration différentes des hépatocytes : la veine ombilicale, qui s'est révélée délétère pour les foetus, et l'injection intraparenchymateuse qui a été parfaite ment tolérée par les animaux. Cette dernière a per mis de mettre en évidence la présence d'hépatocytes allogéniques, c'est-à-dire un microchimérisme 9 jours après transplantation. Nous avons également immor talisé des hépatocytes simiens foetaux en utilisant un vecteur retroviral exprimant grand T de SV40 flan qué de sites lox P. Une lignée cellulaire est maintenant établie depuis 2 ans : elle n'est pas tumorigène après injection sous-cutanée à des souris nude et expriment des marqueurs caractéristiques d'hépatoblastes bipotents, précurseurs des hépatocytes et des cellules des voies biliaires. Après transplantation orthotopique via la veine porte chez des souris nude, ces cellules exprimaient l'albumine jusqu'au moment du sacrifice des animaux (17 jours). Les prochaines étapes seront la mise au point des conditions de transplantation d'hépatocytes transduits primaires et/ou immortalisés chez des foetus plus jeunes (60 jours de gestation) et chez le macaque nouveau-né. SUMMARY In utero allotransplantation and immortalization of non-human primate foetal hépatocytesWe are developing cell therapy approaches on non human primates as a preclinical model for the treat ment of hepatic metabolic diseases.In foetuses, the tissues, including liver, are in expansion, which should facilitate hepatocytes engraftment, and the immune system becomes fully mature only after birth. We have set out conditions for isolation of fetal hepatocytes from macaca mulatta at the end of the 2nd trimester of gestation (90-100 days), their cryopreservation and retroviral transduction. Two different routes of administration of hepatocytes were evaluated : the umbilical vein which was deleterious for the foetuses, and the intraparenchymous injection which was well tolerated by the animals. Administration of hepatocytes into the hepatic parenchyma resulted in microchimerism and

Generation of Hepatocyte-Like Cells from Human Embryonic Stem Cells

“…tion using viral oncogenes such as the SV40 large T antigen has also been accomplished (3,7,23). These immor-The ability of healthy human liver to regenerate is talized hepatocytes can be expanded to large numbers, gradually lost in chronic liver disease.…”