Improvement of plant regeneration and Agrobacterium-mediated genetic transformation of Stylosanthes guianensisMejoramiento de la regeneración de plantas y transformación genética mediada por Agrobacterium en Stylosanthes guianensis Abstract As a pioneer tropical pasture legume, stylo (Stylosanthes guianensis) is well adapted to growth-limiting factors in acid soils. Considering the importance of stylo, there is a need to improve Agrobacterium-mediated genetic transformation to enable development of elite cultivars. In this study, S. guianensis cv. RY5 was used to systematically optimize Agrobacteriummediated transformation based on its plant regeneration. Results showed that Murashige and Skoog (MS) medium containing 0.2 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 2 mg/L 6-benzylaminopurine (6-BA) was the optimal callus induction medium. MS medium supplemented with 2 mg/L 6-BA was suitable for shoot regeneration from cotyledonderived calluses, and 0.5 mg/L indole-3-acetic acid (IAA) and 0.5 mg/L indole-3-butyric acid (IBA) applications were beneficial for rooting. The highest transformation efficiency (67%) was obtained at an Agrobacterium concentration of optical density = 0.6 combined with an infection time of 15 min and 3 days of co-cultivation. Furthermore, 200 mg/mL carbenicillin (Carb) and 0.6 mg/L Basta ® supplements were effective in eliminating excess bacterial growth and selecting transgenic plants, respectively. Subsequent polymerase chain reaction (PCR) analysis confirmed that the β-glucuronidase (GUS) and BAR genes were successfully integrated into the stylo genome. Wider testing of this improved protocol as a means of enhancing genetic improvement and gene function analysis of stylo seems warranted.
ResumenComo leguminosa pionera para pasturas tropicales, stylo (Stylosanthes guianensis) es una especie bien adaptada a los factores limitantes del crecimiento en suelos ácidos. Considerando la importancia de stylo, existe la necesidad de mejorar la transformación genética mediada por Agrobacterium para permitir el desarrollo de cultivares élite. En este estudio, conducido en China tropical, se utilizó S. guianensis cv. RY5 para optimizar en forma sistemática la transformación mediada por Agrobacterium con base en la regeneración de plantas. Los resultados mostraron que el medio Murashige & Skoog (MS) que contenía 0.2 mg/L de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) y 2 mg/L de 6-bencilaminopurina (6-BA) fue el medio óptimo para la inducción de tejido calloso. El medio MS suplementado con 2 mg/L de 6-BA fue adecuado para la regeneración de brotes a partir de callos derivados de cotiledones, y aplicaciones de 0.5 mg/L de ácido indol-3-acético (IAA) y 0.5 mg/L de ácido indol-3-butírico (IBA) fueron beneficiosas para la formación de raices. La mayor eficiencia de transformación (67%) se obtuvo a una concentración de Agrobacterium con densidad óptica de 0.6,
Genetic transformation of Stylosanthes guianensis 481Tropical Grasslands-Forrajes Tropicales (ISSN: 2346-3775) combinada con un tiempo de infección de...