Ação da jararagina na expressão gênica e protéica de mediadores pró-inflamatórios por células endoteliais humanas.

Abstract

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação Interunidades em Biotecnologia USP/Instituto Butantan/ IPT, para a obtenção do Título de Doutor em Biotecnologia. As metaloproteases presentes nos venenos ofídicos (SVMPs) são toxinas-chave envolvidas na patogênese do envenenamento, causando hemorragia e inflamação. A jararagina é uma metaloprotease hemorrágica da classe PIII isolada a partir do veneno de Bothrops jararaca, que em modelo experimental animal possui um efeito pró-inflamatório caracterizado principalmente por edema, liberação de citocinas e migração celular. Compreender como é a resposta inflamatória desencadeada por SVMPs, estabelecendo os principais mediadores inflamatórios no desenvolvimento do dano tecidual, pode contribuir de forma significativa com o tratamento dos efeitos locais dos envenenamentos ofídicos. Neste estudo nós avaliamos e quantificamos por PCR em tempo real a expressão de 9 genes envolvidos com a resposta inflamatória desencadeada pela ação da jararagina em células endoteliais humanas (HUVECs). Estes genes foram selecionados a partir de um experimento prévio de Microarray. Nossos resultados confirmaram um significante aumento na expressão da quimiocina IL-8, moléculas de adesão (E-Selectina, V-CAM-1, I-CAM-1), CD-69, Angiopoetina-2 e MMP-10. Nós também investigamos o efeito da jararagina na expressão protéica de moléculas de adesão e da quimiocina IL-8. A molécula de adesão PECAM-1 foi expressa na superfície das HUVECs em todos os tratamentos e intervalos de tempo analisados. Entretanto não observamos aumento da expressão das moléculas E-selectina e VCAM-1, na superfície de HUVECs tratadas com a jararagina. A jararagina também não induziu a liberação de IL-8 no sobrenadante de HUVECs. Uma vez que a jararagina pode se ligar a plaquetas e fibroblastos desencadeando diferentes respostas celulares nós também investigamos a interação da jararagina com as HUVECs através da integrina α 2 β 1. Nossos resultados sugerem que a jararagina se liga nas células endoteliais, mas o receptor celular envolvido neste efeito ainda não está claro. Este trabalho contribui com a literatura na medida em que elucida a participação de importantes genes dentro do contexto inflamatório desencadeado pela jararagina em células endoteliais, resultante do envenenamento botrópico. Understanding how the inflammatory response is triggered by svmps, establishes the key inflammatory mediators in the development of tissue damage and can contribute significantly to the treatment of local effects of snake envenoming. In this study we evaluated and quantified by real time PCR the expression of 9 genes involved in inflammatory response, triggered by jararhagin in human endothelial cells (HUVECS). These genes were selected from a previous microarray experiment. Our results confirmed a significant increase in the gene expression of chemokine IL-8, adhesion molecules (E-selectin, V-CAM-1, I-CAM-1), CD-69, Angiopoietin-2 and MMP-10. We also investigated the effect of jararhagin on expression of adhesion molecules in the surface...