A validated high performance liquid chromatography method for determination of three bioactive compounds p-hydroxy benzoic acid, negundoside and agnuside in Vitex species

Abstract

A validated rapid and simple isocratic high performance liquid chromatography-photo diode array (HPLC-PDA) method was developed for identification and quantification of p-hydroxybenzoic acid and two iridoids (negundoside and agnuside) in the extracts of two Vitex species, Vitex negundo and Vitex trifolia. The separation of the three compounds was achieved on a RP-18 (250 mm × 4 mm, 5µm) column at 25 ºC using acetonitrile (15%) and 0.05% trifluoroacetic acid in water (85%). The limit of detection (LOD) were 1.0, 2.5 and 2.5 μg ml -1 for p-hydroxybenzoic acid, negundoside and agnuside, respectively. Similarly, the limit of quantification (LOQ) were 2.5, 5.0 and 5.0 μg ml -1 for p-hydroxybenzoic acid, negundoside and agnuside, respectively. Good linearity (r 2 > 0.999) was observed for all three compounds in a wide concentration range. Using the developed HPLC method, the three compounds were identified and quantified in leaves and bark extracts of Vitex negundo and Vitex trifolia. The novelty of the developed and validated HPLC method is that the three marker compounds in the extracts of Vitex species, p-hydroxybenzoic acid, negundoside and agnuside, can be simultaneously identified and quantified within a run time of 25 minute.Keywords: p-hydroxybenzoic acid; iridoids; negundoside; agnuside; Vitex negundo; Vitex trifólia; method validation ВАЛИДИРАН МЕТОД СО ВИСОКОЕФИКАСНА ТЕЧНА ХРОМАТОГРАФИЈА ЗА ОПРЕДЕЛУВАЊЕ НА ТРИ БИОАКТИВНИ СОЕДИНЕНИЈА, p-ХИДРОКСИБЕНЗОЕВА КИСЕЛИНА, НЕГУНДОЗИД И АГНУЗИД ВО ВИДОВИ ОД VITEXРазработен е брз и едноставен валидиран изократски метод со високоефиксна течна хроматографија -детектор со низа диоди (HPLC-PDA) за идентификација и квантитативно определување на р-хидроксибензоева киселина и два иридоиди (негундозид и агнузид) во екстракти од два вида Vitex, Vitex negundo и Vitex trifolia. Раздвојувањето на трите соедеиненија е постигнато на колона RP-18 (250 mm × 4 mm, 5 µm) на 25 ºC со употреба на ацетонитрил (15%) и 0,05% трифлуорооцетна киселина во вода (85%). Границите на детекција (LOD) изнесуваа 1,0 μg ml -1 , 2,5 μg ml -1 и 2,5 μg ml -1 соодветно за р-хидроксибензоева киселина, негундозид и агнузид. Постигната е добра линеарност (r 2 > 0.999) за сите три соедененијиа во широк опсег на концентрации. Со примена на разработениот метод на HPLC, трите соединенија се идентифи-кувани и квантитативно определни во лисја и екстракти од кора на Vitex negundo и Vitex trifolia. Новината на развиениот и валидираниот метод на HPLC e во тоа што е можно трите соединенија во екстракти од видови на Vitex истовремено да се идентификуваат и квантитативно да се определат за само 25 минути.Клучни зборови: р-хидроксибензоева киселина; негундозид; агнузид; Vitex negundo; Vitex trifólia; валидација на метод

A rapid liquid chromatography‐electrospray ionization‐ion mobility spectrometry method for monitoring nine representative metabolites in the seedlings of cucumber and wheat

“…Results showed that the lowest LOD of HA was 0.004 μg. The LOD and linearity range of HA were lower than those of reported methods [31, 32]. In addition, the linearity ranges and LODs of CA, MA, and SU were comparable or even lower than those of using HPLC–MS or colorimetric enzymatic methods [33, 34].…”

A novel second-generation platinum derivative and evaluation of its anti-cancer potential

“…Ten μL reaction mixture was injected at a flow rate of 1 mL/min at 25°C. Detection was carried out at 254 nm (Dhanani, Shah, Kumar, 2015).…”

“…HPLC analysis was performed based on the previously published study (Dhanani, Shah, Kumar, 2015). As shown from Figure 2(C), there are two peaks in chromatogram at 3.5 minutes and 8.2 minutes, belonging to cis-4-hydroxyphenylplatinum(II)diamine 4-hydroxybenzoic acid, respectively.…”