O uso isolamento absoluto com dique de borracha durante o tratamento do canal radicular garante o controle da infecção cruzada e melhoria da eficiência do tratamento. Contudo, no Brasil existem poucos dados sobre a taxa de sua utilização. Esta pesquisa possui como objetivo investigar a frequência e os fatores que influenciam na utilização do isolamento absoluto em procedimentos endodônticos. Trata-se de um estudo observacional e transversal, aprovado pelo parecer de número 5.347.908 do Comitê de Ética em Pesquisa. Para a coleta de dados, utilizou-se de um questionário virtual com 19 perguntas construído pelo Google Forms (Google LLC, Montain View, CA) e distribuído através do whatsApp, e-mail, instagram e telegram. O software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) para Windows, versão 20.0 foi consultado para análise estatística. A significância foi estabelecida em p <0,05. No total, 76 dentistas participaram da pesquisa. Observou-se que não houve valores estatisticamente significativos ao uso do isolamento em termos de sexo (p=0,542), idade (p=0,899) e a região de atuação (p= 0,410). Contudo, houve significância em termos de tempo de formação (p=0,045), instituição de trabalho (p=0,004), grau de escolaridade dos cirurgiões-dentistas (p=0,010) e especialização na área (p=0,000). Além disso, notou-se elevada prevalência pelo uso do isolamento em todos os procedimentos odontológicos (n=59), tanto pelo sexo pelo feminino (n=37) quanto pelo masculino (n=22). Desse modo, o isolamento absoluto endodontia é utilizado com maior frequência em pacientes adultos, após a localização dos condutos radiculares de dentes pré-molares e molares, sendo sua técnica aplicada na maioria dos casos com total domínio pelos dentistas.