A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nuclei

Abstract

-The purpose of this study was to generate repetitive DNA sequence probes for the analysis of interphase nuclei by fluorescent in situ hybridisation (FISH). Such probes are useful for the diagnosis of chromosomal abnormalities in bovine preimplanted embryos. Of the seven probes (E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5) that were generated and partially sequenced, five corresponded to previously described Bos taurus repetitive DNA (E1A, E4A, Ba, W18, W5), one probe (W22) shared no homology with other DNA sequences and one (H1A) displayed a significant homology with Rattus norvegicus mRNA for secretin receptor transmembrane domain 3. Fluorescent in situ hybridisation was performed on metaphase bovine fibroblast cells and showed that five of the seven probes hybridised most centromeres (E1A, E4A, Ba, W18, W22), one labelled the arms of all chromosomes (W5) and the H1A probe was specific to three chromosomes (ch14, ch20, and ch25). Moreover, FISH with H1A resulted in interpretable signals on interphase nuclei in 88% of the cases, while the other probes yielded only dispersed overlapping signals. la sonde W22 ne présenteà ce jour aucune homologie avec les séquences connues dans "Genbank" et la dernière, H1A (3,5 kb isolée après digestion par l'enzyme HindIII) présente une homologie significative sur 158 paires de base avec l'ARNm codant pour le 3 e domaine transmembranaire du récepteur de la secrétine de rat (Rattus norvegicus). L'hybridation in situ fluorescente sur des fibroblastes bovins en métaphase a montré que cinq sondes (E1A, E4A, Ba, W18, W22) hybrident la plupart des centromères, que la sonde W5 marque les bras de tous les chromosomes, et que la sonde H1A est spécifique de trois chromosomes bovins (ch14, ch20 et ch25). De plus, sur noyaux interphasiques, l'utilisation de H1A a permis d'obtenir des signaux interprétables dans 88 % des cas, contrairement aux autres sondes qui donnent des signaux superposés difficilesà interpréter. ADN satellite / FISH / bovin / centromère