Short interfering RNA induced generation and translation of stable 5′ mRNA cleavage intermediates

Singhania, Richa; Pavey, Sandra; Payne, Elizabeth; Gu, Wenyi; Clancy, Jennifer L.; Jubair, Luqman; Preiß, Thomas; Saunders, Nicholas A.; McMillan, Nigel A.J.

doi:10.1016/j.bbagrm.2016.06.005

Cited by 3 publications

(3 citation statements)

References 41 publications

(44 reference statements)

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…HeLa (HPV-18 positive), CasKi (HPV-16 positive), HEK293T, Jurkat cell lines (from American Type Culture Collection), and HeLa-FLAG16E7MYC 44 were cultured in DMEM (Invitrogen) supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (Sigma), and 1% antibiotic mixture of penicillin G, streptomycin sulfate, and L-Glutamine (GIBCO-Invitrogen). The cells were transfected at 70% confluency.…”

Section: Cell Culture and Transfectionmentioning

confidence: 99%

Systemic Delivery of CRISPR/Cas9 Targeting HPV Oncogenes Is Effective at Eliminating Established Tumors

2019

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

The recent advancements in CRISPR/Cas9 engineering have resulted in the development of more targeted and potentially safer gene therapies. The challenge in the cancer setting is knowing the driver oncogenes responsible, and the translation of these therapies is hindered by effective and safe delivery methods to target organs with minimal systemic toxicities, on-target specificity of gene editing, and demonstrated lack of long-term adverse events. Using a model system based on cervical cancer, which is driven by the ongoing expression of the human papillomavirus E6 and E7 proteins, we show that CRISPR/Cas9 delivered systemically in vivo using PEGylated liposomes results in tumor elimination and complete survival in treated animals. We compared treatment and editing efficiency of two Cas9 variants, wild-type (WT) Cas9 and the highly specific FokI-dCas9, and showed that the latter was not effective. We also explored high-fidelity repair but found that repair was inefficient, occurring in 6%-8% of cells, whereas non-homologous end joining (NHEJ) was highly efficient, occurring in $80% of the cells. Finally, we explored the post gene-editing events in tumors and showed that cell death is induced by apoptosis. Overall, our work demonstrates that in vivo CRISPR/Cas editing treatment of preexisting tumors is completely effective despite the large payloads.

show abstract

Section: Cell Culture and Transfectionmentioning

confidence: 99%

Systemic Delivery of CRISPR/Cas9 Targeting HPV Oncogenes Is Effective at Eliminating Established Tumors

2019

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Приклад карти плазміди, яку застосовують як носій генетичної інформації, зокрема для інтерферуючої РНК у формі «шпильки» [19] Фармакологія та лікарська токсикологія, Том Так само основними недоліками РНК-нтерференції, зумовленої олігонуклеотидами, є як висока вартість, так і неспецифічна токсичність під час трансфекції та короткотривале пригнічення експресії гена-мішені. Подоланням цієї проблеми стали альтернативні для експресування міРНК у клітинах ссавців -ДНК вектори [19]. Загалом ДНК вектори використовують промотор РНК полімерази ІІІ (Pol III) для експресії, короткі дволанцюгові РНК у вигляді інвертованих повторів послідовностей, що містять, так звану, «шпильку» (рис.…”

Section: фармакогеноміка -сучасний напрям пошуку ліківunclassified

Новітні Підходи До Фармакотерапії Судинної Дисфункції При Артеріальній Гіпертонії

Новохацька¹

2021

Фармакологія та лікарська токсикологія

View full text Add to dashboard Cite

Артеріальна гіпертонія все ще залишається хворобою, що продовжує погіршувати якість життя населення в усьому світі та збільшує кількість смертельних випадків. Сьогодні існує велика кількість препаратів для лікування гіпертензивних станів, проте всі вони не мають 100 % ефективності, оскільки існує досить велика кількість мішеней, задіяних у виникненні патологій. Учені все ще залишаються в активному пошуку як нових мішеней і ліків, так і методів доставки їх точно до цілі.Судинні дисфункції призводять до виникнення надзвичайно серйозних хвороб, таких як інфаркт чи інсульт, а також до інших порушень в організмі, що суттєво знижують якість життя. Вивчення даного питання є надзвичайно важливим для попередження серцево-судинних захворювань, зменшення рівня івалідизації населення та подовження тривалості життя. Головними перевагами фармакогеноміки є: створення більш ефективних і менш шкідливих специфічних препаратів на основі протеїнів, ензимів і молекул РНК, асоційованих з генами та хворобами; збільшення ефективності лікування; дозування відповідно до віку та ваги, індивідуального набору генів; зменшення ймовірності виникнення/розвитку генетичних хвороб; створення вакцин на основі ДНК або РНК, що активують імунну систему та не здатні спричинити інфікування організму, а також є недорогими, стабільними.Метод РНК-інтерференції є яскравим прикладом використання природних процесів як інструменту для дослідження та терапії. Встановлено, що застосування методу РНК-інтерференції для пригнічення експресії генів викликає тривалий і стабільний інтерференційний ефект, що проявляється в суттєвому зменшенні рівня експресії генів. Сьогодні фармакогеноміка знаходиться на стадії активного розвитку, що в майбутньому дасть змогу на новому рівні забезпечувати терапію хвороб різного генезу. Останнім часом велику увагу дослідників привертає вивчення механізмів регуляції судинного тонусу за участю шляхів, які прямо не пов’язані зі змінами концентрації іонів кальцію та які відіграють досить вагому роль у формуванні судинного тонусу. Артеріальна гіпертонія має велику кількість мішеней для терапевтичного впливу, тому надзвичайно важливим є застосування надточних ліків. Результати чисельних досліджень свідчать про те, що роль протеїнкінази С (ПКС) є однією з ключових у регуляції міогенного тонусу стінки кровоносних судин як за нормальних фізіологічних умов, так і, особливо, за умов розвитку гіпертензивних станів різного генезу. Доказом цього є те, що пригнічення експресії гена δ-ізоформи ПКС призводить до суттєвого зниження артеріального тиску в щурів, яке триває протягом тижня. Дотепер серед фармакологічних засобів лікування артеріальної гіпертонії не існує препаратів, дія яких спрямована на пригнічення ПКС у судинній стінці. Дослідження в цьому напрямі можуть призвести до створення нових класів фармакологічних засобів. І саме застосування фармакогеноміки у вигляді РНК-інтерференції за допомогою плазмідних векторів може стати тим інструментом, що шукають упродовж багатьох років дослідники в усьому світі.

show abstract

“…These concerns are justified, given our limited understanding of how Cas9 endonucleases are actually editing the genome, the high frequency of random edits generated, and the possibility of accumulation of mutations. This dilemma is not unique to CRISPR/Cas9 systems; one study investigated the fate of HPV-16 E7 protein after silencing with siRNA and reported that the truncated 5′ end of the targeted protein is still actively expressed after treatment 89 . This observation raises a critical question about the events that follow the editing and whether the generated knockouts (or knock ins) would be associated with any unexpected outcome.…”

Section: Main Textmentioning

confidence: 99%

The Therapeutic Potential of CRISPR/Cas9 Systems in Oncogene-Addicted Cancer Types: Virally Driven Cancers as a Model System

Jubair

McMillan

2017

Molecular Therapy - Nucleic Acids

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

The field of gene editing is undergoing unprecedented growth. The first ex vivo human clinical trial in China started in 2016, more than 1000 US patents have been filed, and there is exponential growth in publications. The ability to edit genes with high fidelity is promising for the development of new treatments for a range of diseases, particularly inherited conditions, infectious diseases, and cancers. For cancer, a major issue is the identification of driver mutations and oncogenes to target for therapeutic effect, and this requires the development of robust models with which to prove their efficacy. The challenge is that there is rarely a single critical gene. However, virally driven cancers, in which cells are addicted to the expression of a single viral oncogene in some cases, may serve as model systems for CRISPR/Cas therapies, as they did for RNAi. These models and systems offer an excellent opportunity to test both preclinical models and clinical conditions to examine the effectiveness of gene editing, and here we review the options and offer a way forward.

show abstract

Short interfering RNA induced generation and translation of stable 5′ mRNA cleavage intermediates

Cited by 3 publications

References 41 publications

Systemic Delivery of CRISPR/Cas9 Targeting HPV Oncogenes Is Effective at Eliminating Established Tumors

Systemic Delivery of CRISPR/Cas9 Targeting HPV Oncogenes Is Effective at Eliminating Established Tumors

Новітні Підходи До Фармакотерапії Судинної Дисфункції При Артеріальній Гіпертонії

The Therapeutic Potential of CRISPR/Cas9 Systems in Oncogene-Addicted Cancer Types: Virally Driven Cancers as a Model System

Contact Info

Product

Resources

About