In vitro metabolism of the alkaloid piplartine by rat liver microsomes

Técnicas cromatográficas e o desafio na determinação de ­compostos presentes em matrizes complexas: Relato de um caso prático do produto natural piperlongumina

“…Diante do exposto, chega-se a uma primeira hipótese de que realmente seriam formados dois produtos [19] oriundos de reação de oxidação, a qual é possível pelo sistema microssomal [21] . Tal reação os torna mais polares que a piperlongumina e, portanto, eles eluem em tempo anterior a ela.…”

“…Outra conclusão foi a de que os compostos formados apresentam estruturas muito semelhantes, dado o comportamento cromatográfico idêntico no CLAE-DAD. Dessa forma, sugeriu-se que esses compostos tratavam-se de isô-meros [19] , pois a separação completa deles só foi conseguida com o emprego da CLUE, a qual possui um menor tamanho de partícula (1,7 µm), elevado número de pratos e, portanto, uma maior eficiência. Dessa forma, o uso da CLUE foi fundamental nesse estudo, pois possibilitou uma maior separação dos analitos, ao contrário Figura 3 Cromatograma da piperlongumina no meio microssomal: t R = 1,99 minuto e t R = 2,23 minutos (produtos de oxidação), t R = 2,79 minutos (piperlongumina), I*: impureza da piperlongumina; condição cromatográfica: coluna Acquity™ UPLC BEH C18 (Bridged Ethylsiloxane Hybrid) (50 mm × 2,1 mm, 1,7 µm), vazão fase móvel 0,3 mL min -1 ; o comprimento de onda foi fixado em 325 nm; volume injetado: 5 µL; eluição por gradiente empregando acetonitrila e água, ambos com 1% de ácido acético (v/v), que iniciava com 10% de ACN e atingia 100% em 4 minutos.…”

“…A piperlongumina (isolada de Piper tuberculatum) foi gentilmente cedida pelo prof. dr. Massuo Jorge Kato, do IQ-USP. [19] Equipamento de CLAE marca Shimadzu ® (Kioto, Japão), composto de uma bomba LC-20AT, operando a uma vazão de 1 mL min -1 , degaseificador DGU-20A 5, injetor com amostrador de 50 µL SIL-10AF, detector por arranjo de diodo SPD-M20A (190 nm a 800 nm), controladora CBM-20A e forno para coluna modelo CTO-20A, temperatura de análise de 32 °C. As injeções foram realizadas automaticamente (20 µL) e o programa empregado na aquisição dos dados foi o software LC solution, SPD-M20A PDA utility (Shimadzu ® , Kioto, Japão).…”

“…Para o modo por gradiente foi utilizado acetonitrila e água, ambos com 1% de ácido acético (v/v), que iniciava com 10% de ACN e atingia 100% em 30 minutos, a uma vazão de 1 mL min -1 . [19] Equipamento de CLUE: Acquity UPLC™-DAD da Waters ® Corporation (Milford, Massachusetts, EUA), coluna Acquity™ UPLC BEH C18 (Bridged Ethylsiloxane Hybrid) (50 mm × 2,1 mm, 1,7 µm) e temperatura de análise de 32 °C. Como fase móvel, foi utilizado modo de eluição por gradiente, empregando acetonitrila e água, ambas com 1% de ácido acético (v/v), que iniciava com 10% de ACN e atingia 100% em 4 minutos.…”

“…o estudo de metabolismo in vitro e preparo das amostras [19,20] A mistura de incubação (1 mL) consistiu de: 725 µL de tampão fosfato de sódio 0,25 mol L -1 (pH 7,4), 250 µL da solução de incubação contendo NADP + (fosfato de dinucleótido de nicotinamida e adenina) (0,25 mM), glicose-6--fosfato (5 mM) e glicose-6-fosfato desidrogenase (0,5 unidades mL -1 ) em tampão Tris-HCl 0,05 mol L -1 (pH 7,4) com 0,15 mol L -1 KCl [20] . Adicionou-se a fração microssomal do fígado de rato (Protocolo CEUA n. 11.…”