Caracterização cinética e termodinâmica de β-galactosidase de Kluyveromyces marxianus CCT 7082 fracionada com sulfato de amônio

Heidtmann, Renata Bemvenuti; Duarte, Simone; Pereira, Lidiane Pereira de; Braga, Anna Rafaela Cavalcante; Kalil, Susana Juliano

doi:10.1590/s1981-67232012000100005

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“…The half-life values obtained for the immobilized enzyme were higher at all temperatures than those presented by Heidtmann et al 16 for the partially purified free enzyme. 7 obtained a K m of 3.7 mmol L −1 using the free form of the same enzyme.…”

Section: Figure 1 Contour Diagrams For the Immobilization Yield Basecontrasting

confidence: 63%

“…The supernatant was discarded, and the β-galactosidaserich precipitate was dissolved in 0.05 mol L −1 potassium phosphate buffer (pH 6.6) and dialyzed against the same buffer. 16 …”

Section: Enzyme Purificationmentioning

confidence: 99%

“…Heidtmann et al 16 performed a kinetic and thermodynamic characterization of β-galactosidase from K. marxianus CCT 7082 fractionated with ammonium sulfate and identified an optimal temperature of 45-50 °C. These data illustrate that immobilization did not change the optimal temperature of the enzyme.…”

Section: Figure 1 Contour Diagrams For the Immobilization Yield Basementioning

confidence: 99%

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A NEW APPROACH TO EVALUATE IMMOBILIZATION OF β-GALACTOSIDASE ON EUPERGIT^®C: STRUCTURAL, KINETIC, AND THERMAL CHARACTERIZATION

Braga¹,

Silva²,

Oliveira³

et al. 2014

Química Nova

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This study aimed to evaluate β-galactosidase immobilization. For this purpose, the ionic strength of the buffer, reaction time, amount of the immobilization support, and pH were evaluated by a central composite design. Assay 8, which consisted of 1.5 mol L −1 phosphate buffer (pH 7.5) and a reaction time of 2 h, produced the maximum yield. Eupergit ® C (400 mg) was subsequently used as an immobilization support. Immobilization kinetics wereinvestigated, and a significant increase in the yield was obtained after immobilization compared with that obtained from assay 8 (22.0 U mL −1 vs. 15.6 U mL −1). The enzyme efficiency of actuation was evaluated using o-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside and lactose, with lactose providing better results. The reuse of β-galactosidase was evaluated, and more than 50% of the initial enzyme activity was maintained after five cycles of use. Enzyme characterization revealed that immobilization improved some aspects of the thermostability of β-galactosidase.

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Section: Figure 1 Contour Diagrams For the Immobilization Yield Basecontrasting

confidence: 63%

“…The supernatant was discarded, and the β-galactosidaserich precipitate was dissolved in 0.05 mol L −1 potassium phosphate buffer (pH 6.6) and dialyzed against the same buffer. 16 …”

Section: Enzyme Purificationmentioning

confidence: 99%

Section: Figure 1 Contour Diagrams For the Immobilization Yield Basementioning

confidence: 99%

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Braga¹,

Silva²,

Oliveira³

et al. 2014

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“…Quando se trabalha com enzimas que são aplicadas na indústria de alimentos é comum expressar sua inativação usando os parâmetros D e z 11 . O valor de redução decimal D representa a resistência a uma determinada temperatura, enquanto o valor z é expresso em °C e equivale à dependência do fator termodegradável à mudança de temperatura.…”

Section: Bbr -Biochemistry and Biotechnology Reports -Issn 2316-5200 unclassified

Propriedades Termodinâmicas da Enzima Beta-Galactosidase Imobilizada em Eupergit® C

Braga¹,

Silveira²,

Kalil³

2013

BBR - Biochem. Biotechnol.

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INTRODUÇÃOA β-galactosidase é uma enzima hidrolítica com capacidade de transferase para grupos galactosil, atuando no resíduo terminal β-galactopiranosil da lactose para formar seus monossacarídeos glicose e galactose. É utilizada na indústria farmacêutica e alimentícia principalmente na elaboração de produtos destinados a pessoas com intolerância à lactose 1 . A lactose é um dissacarídeo que tem como características principais, baixa solubilidade em água e baixo poder adoçante. A cristalização deste açúcar em produtos lácteos, como leite condensado, e a restrição ao consumo de tais alimentos por pessoas intolerantes a este carboidrato, devido a baixos níveis de β-galactosidase intestinal, podem ser evitadas através do processo de hidrólise enzimático 1 . Dentre as fontes de β-galactosidase destacam-se aquelas obtidas por micro-organismos, principalmente a partir de leveduras do gênero Kluyveromyces, que são considerados seguros, podendo ser utilizados na área de alimentos 2,3 . A imobilização de β-galactosidase é uma ferramenta muito poderosa para melhorar quase todas as suas propriedades, incluindo estabilidade, atividade, seletividade, especificidade e redução de inibição 4 . Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi determinar algumas propriedades enzimáticas da enzima β-galactosidase parcialmente purificada e imobilizada, utilizando Eupergit ® C como suporte. MATERIAL E MÉTODOS Produção, Extração e Purificação da enzima β-galactosidase

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“…5 . A purificação da enzima foi realizada utilizando precipitação com sulfato de amônio até 70 % de saturação 6 . Imobilização da enzima A -galactosidase foi imobilizada através da técnica adsorção seguida por ligação covalente.…”

Section: Introductionunclassified

Determinação do Reuso e Caracterização Estrutural da Enzima Beta-Galactosidase Imobilizada em Eupergit® C

Braga

Silveira

Silva

et al. 2013

BBR - Biochem. Biotechnol.

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RESUMOA imobilização de enzimas é uma das etapas mais importantes na utilização das mesmas, pois permite superar as desvantagens da solubilidade no meio reacional e da instabilidade operacional no seu uso industrial, além de permitir o reuso das mesmas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a imobilização da enzima β-galactosidase de Kluyveromyces marxianus CCT 7082, utilizando Eupergit ® C com suporte, em relação ao seu reuso e sua caracterização estrutural. No estudo do reuso da enzima, a mesma manteve mais de 50% de sua atividade inicial após cinco ciclos de utilização. Adicionalmente, a caracterização do suporte e da enzima β-galactosidase imobilizada foi realizada através de análise de área e de superfície de partículas (BET) e de microscopia eletrônica de varredura (MEV).Palavras-chave: enzima, imobilização, reutilização. INTRODUÇÃOA enzima β-galactosidase é amplamente utilizada na indústria de alimentos, em especial em produtos lácteos. Dentre as fontes da mesma, destacam-se aquelas obtidas por microorganismos, principalmente a partir de leveduras do gênero Kluyveromyces, que são considerados seguros, podendo ser utilizados na área farmacêutica e alimentícia 1,2 . Ambas as formas, solúvel e imobilizada, da enzima β-galactosidase são utilizadas para a hidrólise da lactose, no entanto, algumas propriedades da enzima solúvel podem dificultar seu uso. A utilização de um catalisador relativamente dispendioso exige, em muitos casos, a sua recuperação e reutilização e isso só é possível quando a enzima se encontra imobilizada 3 . A avaliação da imobilização através da caracterização estrutural pode fornecer informações importantes, principalmente, no sentido de assegurar a ligação suporte/enzima. Ao utilizarmos o suporte Eupergit ® C, a enzima é ligada ao mesmo, inicialmente por adsorção com posterior ligação covalente 4 . Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a imobilização da enzima β-galactosidase obtida de Kluyveromyces marxianus CCT 7082 em Eupergit ® C através do seu reuso e da caracterização estrutural da mesma.

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Caracterização cinética e termodinâmica de β-galactosidase de Kluyveromyces marxianus CCT 7082 fracionada com sulfato de amônio

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