Comparison of primers for RAPD-PCR from environmental isolates of Cryptococcus neoformans, Cryptococcus albidus and Cryptococcus laurentii complex

Abstract

Various organisms have been characterized by molecular methods, including fungi of the genusCryptococcus. The purposes of this study were: to determine the discriminatory potential of the RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) primers, the pattern of similarity of the Cryptococcus species, and discuss their useful application in epidemiological studies. We analyzed 10 isolates of each specie/group: C. albidus, C. laurentii complex, C. neoformans var. grubii, all from environmental source, and two ATCC strains, C. neoformans var. grubii ATCC 90112, and C. neoformans var. neoformans ATCC 28957 by RAPD-PCR using the primers CAV1, CAV2, ZAP19, ZAP20, OPB11 and SEQ6. The primers showed a good discriminatory power, revealing important differences between them and between species; the SEQ6 primer discriminated a larger number of isolates of three species. Isolates of C. laurentii showed greater genetic diversity than other species revealed by all six primers. Isolates of C. neoformans were more homogeneous. Only the primer CAV2 showed no amplification of DNA bands for C. albidus. It was concluded that the use of limited number of carefully selected primers allowed the discrimination of different isolates, and some primers (e.g., CAV2 for C. albidus) may not to be applied to some species.

Características in Vitro De Isolados Do Complexo Cryptococcus Laurentii Em Diferentes Meios De Cultura

“…Colônias de C. neoformans e C. gattii apresentam coloração marrom ou escura em meios contendo substratos fenólicos e difenólicos, como ágar níger, ágar semente de girassol ou L-dopa. Estas características diferenciam os isolados de C. laurentii e de outras espécies do gênero, que não produzem este pigmento ou o produzem fraca e tardiamente (18,19).…”

“…Provas de fermentação de carboidratos não se prestam para identificação de espécies de Cryptococcus, visto que os isolados deste gênero não produzem gás a partir daquelas fontes. No exame microscópico diretamente do material clínico ou de colônias de cultura, as células geralmente apresentam cápsulas de espessura variável (10,11,19).…”

“…Assim como já foi descrito anteriormente na literatura (10,19), os isolados de C. laurentii apresentam crescimento variável quando incubados à temperatura de 37ºC, contribuindo para mostrar a diversidade fenotípica dos isolados desta complexa espécie. Nenhum dos isolados produziu melanina (atividade de fenoloxidase) em ágar níger, diferentemente do isolado de C. neoformans, que mostrou pigmento entre 24 e 48 horas de incubação.…”

“…As infecções ocorrem principalmente em indivíduos imunocomprometidos, no entanto podem acometer também os imunocompetentes (12). Existem relatos de infecções no sistema nervoso central, nos tecidos cutâneos e na pele, além de casos de fungemia e pneumonia (1,8,9,19). O tratamento dos indivíduos infectados é semelhante ao tratamento de infecções por Cryptococcus neoformans, que tem protocolo definido (1,9).…”

“…O tratamento dos indivíduos infectados é semelhante ao tratamento de infecções por Cryptococcus neoformans, que tem protocolo definido (1,9). Estudos sobre sensibilidade in vitro aos antifúngicos são escassos, não havendo estudos conclusivos que relacionem resultados in vitro com a resposta clínica (1,8,9,19,22).…”