Comparative evaluation of pyrogens tests in pharmaceutical products

Abstract

A comparison of methodologies for detection of pyrogens in pharmaceutical products was performed. The rabbit pyrogen test was optimized and the dose-response curve was obtained for the 2 nd International Standard for bacterial endotoxins, establishing 13.81 EU/mL/kg as the concentration of endotoxin necessary to induce a temperature rise of 0.5ºC. The 0.5ºC cut-off was shown to give results that were more compatible with the pyrogenic doses for humans. The Limulus amoebocyte lysate test (LAL) was standardized with gel-clot and chromogenic endpoints, and used for the comparative evaluation of pharmaceutical products showing good agreement. The use of β-glucan-reactive and non-reactive LAL reagents identified some products with falsepositive results. The interference test was carried out and the specifications validated for some new products as the maximum valid dilution. The results emphasized the importance and limitations of the assays recommended for the evaluation of purity and quality control of parenteral medicinal products, improving the existing methodologies in the context of reduction and replacement in the use of animal models.

Avaliação de pirogênios em produtos de uso veterinário pelos testes da hipertermia em coelhos e do lisado de amebócitos do Limulus

“…Validou-se o procedimento para produtos com excipientes oleosos por via subcutânea, designando-se três grupos de animais, respectivamente, para controle positivo, amostra e amostra contaminada com a dose pirogênica equivalente a 15UE ml -1 kg -1 do segundo padrão internacional de endotoxinas bacterianas (SILVEIRA et al, 2004). Prolongou-se o tempo de leitura, registrando-se as respostas correspondentes durante quatro horas.…”

“…A média geométrica (M) para as soluções foi calculada pela equação M = antilog (∑e/f), em que ∑e = soma dos logaritmos da menor concentração de endotoxinas com reação positiva em cada série de diluições da amostra e f = número de replicatas. Considerou-se a amostra sem fatores interferentes quando a sensibilidade do LAL (λ), determinada na presença da solução do produto, foi igual ou maior que 0,5λ e igual ou menor que 2λ (EP., 2002;SILVEIRA et al, 2004).…”

“…O ensaio foi realizado em placas de Petri ou em tubos de ensaio (SILVEIRA et al, 2004), ajustandose os volumes dos reagentes e mantendo-se a relação constante. Em placa de polietileno, adicionaram-se, em duplicata, 10 μl do reagente LAL e 10μl de cada diluição da amostra ou padrão.…”

Utilização de métodos alternativos na determinação da contaminação pirogênica no controle de produtos injetáveis sujeitos à vigilância sanitária

“…Existem poucos trabalhos relacionando o LAL e a detecção de endotoxinas nesses produtos. Alguns artifícios são descritos na literatura buscando minimizar os efeitos no teste dos interferentes ou inibidores presentes (SILVEIRA et al, 2004;REINHARDT, 2008).…”

Effect of different methods of sterilization on the inactivation of bacterial endotoxin (LPS) in endodontic files

“…The Kinetic-QCL TM test is used for the evaluation of small volumes of parenteral solutions, vaccines, antibiotics and biological products because it is less affected by products that can cause false-positive or false-negative results. It has been used in the medical and pharmaceutical fields (5,17) due to its high dependability and precise results. The Kinetic-QCL ® test was chosen for the present study because of its high sensitivity for detection of bacterial endotoxin at concentrations between 0.0005 and 50 EU/mL (3).…”