The present study describes callus induction and the subsequent plant regeneration with alkaloids accumulation in stem and shoot tip explants of Phyla nodiflora. Both explants were cultured on different media (MS, B5, SH and WPM) for callus induction. Stem explants showed better callus biomass (dry weight) than shoot tip explants with green compact callus when cultured on MS medium containing 1.5 mg L -1 α-naphthalene acetic acid. Shoots were regenerated from the callus on MS medium with 1.5 mg L -1 α-naphthalene acetic acid and 1.0 mg L -1 benzyl adenine. The rooting of all regenerated shoots was successfully performed on half-strength MS medium with 1.0 mg L -1 indole-3-butyric acid. The plantlets were acclimatized and established in soil (90%) and exhibited morphological characteristics similar to those of the mother plant. In addition, the alkaloids content was higher in regenerated callus than intact stem and shoot tip explants, which were analyzed by a gravimetric method, TLC (thin layer chromatography) and HPTLC (high performance thin layer chromatography). The proposed method could effectively be applied for the conservation and clonal propagation to meet the pharmaceutical demands of this medicinally important species.Additional key words: callus biomass; gravimetric method; growth curve; HPTLC; rooting; TLC.
ResumenCondiciones optimizadas para inducción de callos, regeneración de plantas y acumulación de alcaloides en explantes de tallos y brotes de Phyla nodiflora El presente estudio describe la inducción de callos y la posterior regeneración de plantas con la acumulación de alcaloides en los explantes de tallos y brotes de Phyla nodiflora. Para la inducción de callos, ambos explantes fueron cultivados en diferentes medios (MS, B5, SH y WPM). Los explantes de tallos tuvieron mejor biomasa (peso seco) de callo que explantes de ápices de naturaleza verde compacta cuando se cultivaron en un medio MS con 1,5 mg L -1 de ácido α-naftalén acético. Los brotes fueron regenerados a partir de los callos en medio MS con 1,5 mg L -1 de ácido α-naftalén acético y 1,0 mg L -1 de benciladenina. El enraizamiento de todos los brotes regenerados se realizó con éxito en un medio ½ MS con 1,0 mg L -1 de ácido indol-3-butírico. Las plántulas fueron aclimatadas y establecidas en suelo (en un 90%) y mostraron características morfológicas similares a las de la planta madre. Además, el contenido de alcaloides fue mayor en los callos regenerados que en los explantes de tallo y brotes intactos, que fueron analizados por un método gravimétrico, TLC y HPTLC. El método propuesto se podría aplicar con eficacia para la conservación y propagación clonal, a fin de satisfacer la demanda farmacéutica de esta especie medicinalmente importante.