Nuclear halo from Bradysia hygida (Diptera:Sciaridae) salivary gland polytene cells

Abstract

A protocol for recovered nuclear halos from insect polytene nuclei after the extraction of the nuclear proteins using LIS detergent is reported in this work. Analysis was carried out using fluorescence and confocal laser scan microscopy. The extraction of nuclear halos was possible only with nuclei-fraction isolation in hypotonic buffer without spermine and spermidine. The recovered nuclear halos from Bradysia hygida salivary gland polytene nuclei, contributed greatly to the study of the structure and function of these special organelles.<br>Observações à microscopia eletrônica e estudos bioquímicos de cromossomos e núcleos sem histonas tem suportado a hipótese que o DNA de eucariotos é organizado em alças associadas com o esqueleto cromossômico ou à matriz nuclear. A observação da matriz nuclear sem a remoção do DNA, através da digestão com enzimas de restrição, apresenta uma figura em halo que representa a liberação das alças de DNA. Um protocolo para a obtenção de halos nucleares de núcleos politênicos de insetos, através da extração de proteínas usando o detergente LIS, é reportado nesse trabalho. Foram realizadas análises utilizando-se microscopia de fluorescência e microscopia de varredura confocal a laser. A extração de halos nucleares foi possível somente com o isolamento da fração nuclear em tampão sem espermina e espermidina. A obtenção de halos nucleares de núcleos politênicos de glândula salivar de Bradysia hygida contribui significativamente para o estudo da estrutura e função dessas organelas tão especiais

Molecular combing in the analysis of developmentally regulated amplified segments of Bradysia hygida

“…Studies of this DNA segment have identified a region with numerous sites of bent DNA and a significant site localized to approximately 2000 bp upstream of the BhC4-1 gene transcription start site (Fiorini et al, 2001). Sites of association with the nuclear matrix have also been identified in this segment (Mikami, 2000;Polinarski, 2005). The challenge of identifying the replication initiation site within this developmentally regulated amplification segment introduces difficulty into correlations with either the intrinsic bent DNA sites or the sites of association with the nuclear matrix in the BhC4-1 gene amplicon with replication initiation.…”