RESUMO -2,3-Butanodiol pode ser obtido via processo fermentativo utilizando glicerol como substrato. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da concentração de glicerol sobre o crescimento e a produção de butanodiol por Enterobacter aerogenes. Foram avaliadas concentrações iniciais de glicerol (S 0 ) de 20, 40, 60, 80 e 100 g/L. Os valores de conversão de substrato em células (Y X/S ) obtidos foram 0,13, 0,05, 0,03, 0,03 e 0,01 g/g. Em termos de conversão de substrato em produto (Y P/S ), os valores calculados foram 0,26, 0,31, 0,33, 0,42 e 0,45 g/g, respectivamente, com maior rendimento em relação ao máximo teórico (93%) para S 0 de 100 g/L. Em razão da limitação de oxigênio dissolvido, especialmente em cultivos de maior duração, houve um decréscimo do rendimento em ATP e consequentemente, menor formação de biomassa; por outro lado a síntese de produto aumentou devido à necessidade de reoxidação de NADH pela via fermentativa.