Sinais de proliferação via regulação de histona H3 em modelo in vitro de linfoproliferação

Abstract

ResumoA ativação da célula T é crucial para o desenvolvimento da resposta imune específica. Após os sinais antígeno-específico e não específico, a co-estimulação e a atuação das citocinas, ocorre ativação, expansão, resposta imunológica e, finalmente, a supressão destes linfócitos através da apoptose. A desregulação deste processo está associada com muitos distúrbios imunológicos como as neoplasias, e pode resultar de alterações nucleares. O DNA genômico encontra-se enrolado em um octâmero central de proteínas histonas formando o nucleossomo, a unidade básica da cromatina. Estas proteínas histonas possuem importante papel na manutenção do equilíbrio dinâmico da cromatina pelo qual a regulação da expressão gênica é atingida. As histonas possuem resíduos amino-terminais que são suscetíveis a uma variedade de modificações pós-traducionais como metilação, acetilação, fosforilação, e outras. Cada modificação individualmente é "lida" por proteínas que modulam a estrutura da cromatina e, conseqüentemente, a transcrição. E o conjunto destas modificações representa um complexo de informações epigenéticas conhecido como Hipótese do Código de histona. O objetivo principal do presente estudo foi comparar alterações nucleares envolvendo a histona H3 em linfócitos de doadores normais e células T de linhagem leucêmica (Jurkat) mantidos em cultura sob o estímulo da fitohemaglutinina, nos tempos de 72 hs, 96 hs e 120 hs. Foram estudadas, através da técnica de imunofluorescência com anticorpos específicos, as seguintes modificações na histona H3: fosforilação da serina 10 (H3PS10), acetilação da lisina 9 (H3AcK9) e metilação da lisina 9 (H3MeK9). Os linfócitos dos doadores normais foram purificados através do gradiente de densidade. Os resultados demonstraram que a curva de crescimento dos linfócitos normais exibiu momentos bem definidos de proliferação (72 -96 hs) e apoptose (96 -120 hs). Nestas células, o perfil da acetilação e da fosforilação da histona H3 foi parecido com o da curva de crescimento, porém, a metilação demonstrou um aumento contínuo em todos os momentos. A curva de crescimento das células Jurkat exibiu um aumento do número de células em cada momento, entretanto, não houve diferença entre as três modificações na proteína histona. Estes achados sugerem que os mecanismos epigenéticos estão envolvidos na transformação neoplásica e resultam na diminuição da metilação da histona H3 em linfócitos leucêmicos. Palavras-chave:Linfócitos; linfoproliferação; cromatina; histonas; epigenética; apoptose. AbstractT-cell activation is crucial for the development of specific immune reactions. After antigen-specific and nonspecific signals, costimulation and cytokine performance, activation, expansion, immunologic response and, finally, suppression of lymphocytes occurs by apoptosis. Dysregulation of this process is associated with many immune disorders like neoplasia which may result from nuclear alterations. The genomic DNA is wrapped around an octamer of core histone proteins constituting the nucleosome, the basic unit of chro...