Validação de métodos alternativos qualitativos na detecção de patógenos alimentares

Abstract

Resumo As Doenças de Origem Alimentar (DOA) são um perigo de grande relevância para a saúde humana e para a economia dos indivíduos, famílias e nações. O risco de disseminação de microrganismos patogênicos vem crescendo continuamente, e programas de controle de qualidade microbiológica são empregados em toda a cadeia de produção alimentar a fim de minimizar o risco de infecção e/ou intoxicação. A utilização de métodos de detecção alternativos de microrganismos é uma das ferramentas que podem ser utilizadas para garantir a segurança microbiológica dos produtos. Contudo, para que a metodologia utilizada forneça resultados confiáveis é necessário que ela seja validada. A validação deve garantir, por meio de estudos experimentais, que o método atenda às exigências das aplicações analíticas, assegurando a confiabilidade dos resultados, devendo apresentar níveis adequados de acurácia, precisão, limite de detecção, robustez, repetitividade, reprodutibilidade, especificidade, linearidade e exatidão. Embora existam diversos guias descrevendo a validação de métodos analíticos, comparativamente, pouco se tem dito a respeito da validação de métodos microbiológicos e, menos ainda, de métodos moleculares. O objetivo deste trabalho é fazer uma revisão dos parâmetros necessários para validação de métodos alternativos qualitativos na detecção de patógenos alimentares. Palavras-chave Validação, Doenças de Origem Alimentar, DOAAbstract Food-Born Diseases (FBD) are a considered an important hazard for human health and the economy on individual, family and national level. The risk of dissemination of pathogens increases continuously and microbiological quality control programs are employed in the entire food chain in order to minimize the risk of infection and/or intoxication. The use of alternative methods for the detection of microorganisms is one of the tools for granting the microbiological safety of the products. For obtaining reliable results however the method needs to be validated. The purpose of the validation is to ensure through experimental studies that the method is meeting the requirements of analytical applications, ensuring the reliability of results and adequate levels of accuracy, precision, detection limit, solidity, repeatability, reproducibility, specificity, linearity and exactness. Although there are some guides describing the validation of analytical methods, comparatively little has been said regarding validation of microbiological methods and even less with respect to molecular methods. The aim of this work is to review the parameters necessary for validating qualitative alternative methods in the detection of food-born diseases.

Validation of two real-time PCRs targeting the PE-PGRS 20 gene and the region of difference 4 for the characterization of Mycobacterium bovis isolates

“…Both qPCRs were developed for qualitative results; hence, the amount of DNA added to reaction mixes was not precise, varying between 20 and 200 ng, explaining the data shown in both tables. These two parameters must also be confirmed in the regulation for laboratory accreditation (Freitas et al, 2006). Hence, qPCR validation was essential to prove that the same results could be reproduced despite variations in day, analyst, reagents, equipment, and laboratory.…”

COMPARAÇÃO DA SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE ENTRE DOIS MÉTODOS DE IDENTIFICAÇÃO DE Candida albicans

“…Conforme Brito et al (2003), o termo especificidade é definido como a capacidade que um método possui em distinguir o analito de interesse de outros componentes presentes na amostra. Já a sensibilidade, segundo Freitas et al (2006), refere-se à habilidade de detecção do analito alvo em determinada concentração dentro de uma matriz biológica. Estes parâmetros são de grande importância para a garantia da confiabilidade dos resultados apresentados por determinado método (BRITO et al, 2003;FREITAS et al, 2006).…”

“…Já a sensibilidade, segundo Freitas et al (2006), refere-se à habilidade de detecção do analito alvo em determinada concentração dentro de uma matriz biológica. Estes parâmetros são de grande importância para a garantia da confiabilidade dos resultados apresentados por determinado método (BRITO et al, 2003;FREITAS et al, 2006). Assim, juntamente com critérios de linearidade, exatidão, precisão e limite de detecção a especificidade e sensibilidade são parâmetros necessários para a validação de um método analítico (BRITO et al, 2003).…”

Padronização de uma PCR para a autenticação do Salmo salar em pratos da culinária japonesa

“…Com base nisso, Hassan et al (2004) destacam que a técnica de PCR é considerada promissora para detecção e identificação molecular em uma variedade de amostras, mas que o método é limitado por vários parâmetros físicos e químicos. Os pontos usualmente mais críticos são a qualidade do DNA molde ou a presença de inibidores da reação (Freitas et al, 2006).…”