O portaenxerto para Prunus Mr. S. 2/5 não produz sementes, portanto a sua multiplicação só é possível por via assexuada. Para esse tipo de material vegetal, a propagação in vitro pode ser uma estratégia viável para obter alta taxa de multiplicação em curto espaço de tempo. Sendo assim, o presente trabalho buscou identificar a melhor composição salina do meio, pH, fonte de carboidrato e concentração de AIB no meio de cultura, que proporcionam as melhores taxas de multiplicação in vitro do portaenxerto ‘Mr. S. 2/5’. Este estudo foi dividido em três experimentos, sendo todos conduzidos a partir de explantes com 1 cm, contendo 20 explantes por tratamento, cultivados em sala de crescimento a 25±2<sup>o</sup>C, fotoperíodo de 16 horas e densidade de fluxo luminoso de 48 μmol m-2s-1. As avaliações foram realizadas sempre aos 30 dias após a instalação de cada experimento. Em meio MS com pH 5,2 obteve-se o maior número de brotações por explante. Entretanto, a fonte e a concentração de carboidrato não exerceram influência sobre o número e o comprimento das brotações formadas. Quando o meio foi suplementado com 0,06 mg L<sup>-1</sup> de AIB se registrou a formação do maior número de brotações, porém sem influência significativa no comprimento das mesmas.