Transporte de oócitos bovinos em meio de maturação sem controle de atmosfera gasosa

Abstract

Oócitos (n=1177) bovinos obtidos da aspiração de folículos com diâmetro entre 2 e 8mm, de ovários de matadouro foram divididos aleatoriamente em quatro tratamentos com 11 repetições. Os oócitos foram maturados por 24h em TCM-199 Sais de Earle, acrescido de 25mM de bicarbonato de sódio, 25mM de HEPES, rFHS-h, Soro de Vaca em Estro (SVE) e piruvato, em estufa a 39ºC, com 5% de CO2 em ar e umidade saturada (Grupo Controle, n=296) ou, submetidos ao transporte simulado por 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) ou 18h (T18, n=301) em meio de maturação TCM+HEPES, em banho-maria a 39ºC, com os mesmos componentes utilizados para o Grupo Controle, porém com apenas 1mM de bicarbonato. Decorrido cada período de transporte, os mesmos foram transferidos para placas com meio de maturação, completando o período de 24h em estufa, nas mesmas condições do Grupo Controle. O período de fecundação foi de 18h em condições semelhantes de temperatura e atmosfera gasosa, em FERT-TALP acrescido de heparina, sendo a dose inseminante de 1x106 espermatozóides/mL, selecionados por migração ascendente. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF + 5% SVE por 8 dias, em estufa a 39ºC, em bolsas gaseificadas com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na avaliação da clivagem, não houve diferença entre os tratamentos. As taxas de desenvolvimento embrionário no dia 7 foram semelhantes para os grupos Controle (20,9%), T6 (19,2%) e T12 (21,4%), com uma redução (P<0,05) observada no grupo T18 (12,3%), em relação aos grupos Controle e T12. No dia 9, o T18 apresentou uma menor (P<0,05) produção de blastocistos expandidos mais eclodidos, em relação aos demais grupos, embora não tenha sido observada diferença (P>0,05) na taxa de eclosão. O número médio de células dos blastocistos eclodidos não diferiu (P>0,05) entre os grupos Controle (136), T6 (125,5) e T12 (126,8). Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos em meio de maturação TCM+HEPES, sem controle da atmosfera gasosa, a 39ºC, pelo período de até 12h. Esta técnica oferece uma alternativa prática e eficiente para o transporte dos oócitos bovinos destinados à produção in vitro de embriões bovinos (PIV).

Transporte de oócitos bovinos em meio de maturação por diferentes períodos de tempo sem controle da atmosfera gasosa

“…Resultados mais elevados foram obtidos por Olivier et al (1998), quando transportaram oócitos em tubos de poliestireno colocados em bolsas plásticas, gaseificadas, levadas para mini-incubadora e posteriormente colocados em banho-maria, ao obterem taxas de clivagem de 84,3% e 82,0% para o sistema de banho-maria e grupo-controle, respectivamente. As taxas de clivagem obtidas por esses autores assemelham-se às taxas de Leivas et al (2004), que, ao submeterem oócitos ao transporte simulado por seis, 12 e 18 horas em meio de maturação TCM (sais de Earle) + Hepes, em banho-maria a 39ºC, alcançaram taxas de clivagem de 81,5%, 85,4% e 76,1%, respectivamente. Carvalho et al (2007) obtiveram resultados semelhantes, pois, ao testarem a eficiência do SIBC com injeção do ar expirado dos pulmões em comparação ao SIC e usarem diferentes meios de cultivo − SOF e CR 2 −, não observaram diferença entre os sistemas quanto às taxas de clivagem, independentemente dos meios de cultivo utilizados − SOF de 81,7% e 71,0%, respectivamente e CR 2 de 76,2% e 79,4%, respectivamente.…”

“…1). Wrenzycki et al (2004) e Rizos et al (2002) citaram que a taxa máxima obtida de blastocisto bovino está em torno de 30-40%, no entanto Leivas et al (2004) afirmaram que oócitos submetidos ao transporte simulado em banho-maria por 6h (19,2%) e 12h (21,4%), em meio de maturação TCM (sais de Earle's) + Hepes, alcançaram taxas mais altas de blastocistos. Lehmkuhl et al (2000) afirmaram que o transporte de oócitos bovinos em líquido folicular bovino produziu taxas viáveis de blastocistos de 22,3%, 19,4%, 24,4% e 26,7% para o grupo-controle e para os grupos submetidos ao transporte por duas, quatro e seis horas, respectivamente.…”

Validação De Um Programa De Produção in Vitro De Embriões Bovinos Com Transporte De Oócitos E De Embriões Por Longas Distâncias

“…Os dados foram processados usando-se o Statistical Package for Social Science (SPSS, versão 19). Para tanto, realizou-se a seguinte sequência de análises: 1-a média e o desvio padrão das características de interesse ao estudo foram obtidas por meio da análise descritiva; 2-as diferenças entre os números de oócitos clivados e os números de embriões produzidos entre os grupos CONV e SEX foram comparados utilizando-se o teste T de Student; 3-as taxas de gestação entre os grupos CONV e SEX e entre os grupos com embriões de diferentes idades (TE-6,5D; TE-7,0D; TE-7,5D) foram comparadas empregando-se um estudo de dispersão de frequências utilizando o teste de Qui-quadrado (χ 2 ).…”

“…Esses autores não encontraram efeito do transporte de oócitos sobre o desenvolvimento embrionário in vitro, sugerindo-o como uma alternativa para melhorar o emprego da OPU/PIVE. Contudo, Leivas et al (19), ao trabalharem com transporte de oócitos bovinos em meio de maturação associado a um tampão orgânico Hepes, sem controle de atmosfera gasosa a 39 ºC, verificaram uma redução significativa do desenvolvimento embrionário quando a duração do transporte prolongou-se por até 18 horas. Esses resultados foram atribuídos a uma possível incapacidade do tampão Hepes em manter o pH por até 18 horas, o que pode ter determinado prejuízos no desenvolvimento posterior dos embriões.…”

Estudo Sobre O Cultivo in Vitro De Embriões Bovinos Durante O Transporte

“…Contudo, Leivas et al (2004), ao trabalharem com transporte de oócitos bovinos em meio de maturação associado a um tampão orgânico Hepes, sem controle de atmosfera gasosa e com temperatura de 39ºC, verificaram uma redução significativa no desenvolvimento de embriões submetidos ao transporte por até 18 horas. Os autores relataram que os resultados negativos foram em função da incapacidade do tampão em manter o pH estável por até 18 horas, fato que prejudicou o desenvolvimento dos embriões.…”