Development and validation of an LC-UV method for quantification of a new thiazolidinedione (LPSF/AC-23) with antitumor activity in rat plasma

Abstract

Um método rápido e simples de LC-UV (cromatografia líquida com detecção ultravioleta) foi desenvolvido e validado para quantificação do 5-acridina-9-ilmetileno-3-(4-flúor-benzil)tiazolidina-2,4-diona (LPSF/AC-23) em plasma de ratos utilizando extração por precipitação proteica com acetonitrila, e uma tiazolidinadiona (3-(2-bromo-benzil)-5-(5-bromo-2-metoxibenzilideno)-tiazolidina-2,4-diona) como padrão interno. A separação e quantificação do LPSF/AC-23 foi realizada utilizando uma fase móvel composta por uma mistura de acetonitrila/metanol/tampão fosfato (55:30:15) eluída de forma isocrática através de uma coluna analítica C 18 seguida de detecção UV a 249 nm. A curva de calibração foi linear na faixa de 100-10.000 ng mL-1. A precisão intra e interdia apresentou valores de desvio-padrão relativo preconizados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) e a exatidão, expressa pelo erro relativo, variou de-3,49 a 7,67%. A recuperação foi de 92,25% para o analito e 89,67% para o padrão interno e nenhum interferente endógeno foi observado. Desta forma, o método proposto pode ser aplicado na determinação quantitativa do LPSF/AC-23 em plasma de ratos em estudos farmacocinéticos e de biodisponibilidade. A quick and simple LC-UV (liquid chromatography with ultraviolet detection) method was developed and validated for quantification of 2,4-thiazolidinedione,5-(9-acridinylmethylene)-3-[(4-fluorophenyl)methyl] (LPSF/AC-23) in rat plasma using protein precipitation extraction with acetonitrile, and a thiazolidinedione 2,4-thiazolidinedione,5-[(5-bromo-2-methoxyphenyl) methylene]-3-[(2-bromophenyl)methyl] as an internal standard. The separation and quantification of LPSF/AC-23 were performed using a mobile phase consisting of a mixture of acetonitrile/methanol/phosphate buffer (55:30:15) eluted in an isocratic manner through a C 18 analytical column followed by UV detection at 249 nm. The calibration curve was linear in the range of 100-10,000 ng mL-1. The intra-and inter-day precisions expressed by relative standard deviation values were recommended by the Brazilian Health Surveillance Agency (Anvisa), and accuracy expressed by relative error ranged from −3.49 to 7.67%. The recovery was 92.25% for the analyte and 89.67% for the internal standard and no endogenous interference was observed. Thus, the proposed method can be applied to quantitative determination of LPSF/AC-23 in plasma of rats, in pharmacokinetic and bioavailability studies.

A Review on Bioanalytical Method Development and Various Validation Stages Involved In Method Development Using RP- HPLC

“…UV detector is cost effective but can be used only for high analyte concentration (µM range), for small sample volumes and low concentration levels (nM, pM) the mass spectrometry is most useful detector. [14][15][16][17][18] In…”