Qualitative and quantitative analysis of rabbit's fat mesenchymal stem cells

Abstract

Purpose:To present an experimental model of qualitative and quantitative analysis of mesenchymal stem cells from fat of rabbits obtained by lipectomy. The fat could be a great source for obtaining mesenchymal stem cells and to create conditions for repairing injured tissues by bioengineering. Methods: New Zealand rabbits (n= 10) adipose panicle (2-3 cm) were removed by lipectomy, fragmented and washed with PBS and enzymatically dissociated with trypsin/EDTA. Lately, these cells were incubated in culture medium DMEM and after 20 days, was performed quantitative analysis of the accession of first and second mesenchymal cells in cell culture bottles. Results: The fat total cells (CTF) were 1.62 x10 6 cells/mL and presented 98% of viability. These cells were taken for cultivation and after 20 days were counted 2.88 x10 6 cells/mL MSC. The same was done and after 20 days we quantified 4.28 x10 6 cells/mL MSC. Conclusion: The lipectomy of adipose panicule is a very satisfactory method to extract stem cells from fat, quantitatively and qualitatively. Key words: Lipectomy. Stem Cells. Fats. Rabbits. RESUMOObjetivo: Apresentar um modelo experimental de análise qualitativa e quantitativa de células tronco mesênquimais proveniente da gordura de coelhos obtido por lipectomia. A gordura poderia ser uma grande fonte de obtenção de células tronco mesenquimais, criando condições para a reparação de tecidos lesados. Métodos: Foram removidos os panículos adiposos (2-3 cm) da região cervical de Coelhos Nova Zelândia (n = 10) por lipectomia. Os panículos foram fragmentados e lavados com PBS e, posteriormente, dissociados enzimaticamente com tripsina / EDTA. As células extraídas do panículo adiposo foram incubadas em meio de cultura DMEM e após 20 dias, foi realizada uma análise quantitativa da adesão de primeira e segunda passagem das células mesênquimais em garrafas de cultura. Resultados: Foram extraídas 1,62 x106 cel/ mL células totais de gordura (CTG) with 98% de viabilidade. Essas células foram levadas para o cultivo e após 20 dias, foi realizada a primeira passagem (1pd) sendo quantificadas 2,88 x10 6 cel/mL células tronco mesênquimais (CTM). Na segunda passagem (2pd) foi obtido 4,28 x10 6 cel/mL CTM. Conclusão: A lipectomia do paniculo adiposo é um método muito satisfatório para extrair células tronco a partir de gordura, quantitativamente e qualitativamente. Descritores: Lipectomia. Células-Tronco. Gorduras. Coelhos.

Adipose stromal/stem cells assist fat transplantation reducing necrosis and increasing graft performance

“…Therefore, enzymatic digestion procedures and amplification were here optimized to generate sufficient numbers of progenitors starting from 150 mg of AT in comparison with previous procedures that rely on at least 10 g of AT [33, 34]. Beside an improved isolation step, by ex vivo amplification we were able to obtain an average of 10 8 ASC for each ml of lipoaspirate in 20 days, while there have been previously described expansions between 0.2–4 × 10 6 /ml after 40 days of culture [33, 35, 36]. These differences may be related to distinct factors, such as the anatomic site of harvested AT and the in vitro expansion conditions.…”

Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45

“…Após expansão em cultura, Forriol & Esparza (2008) encontraram percentagens de células-tronco mesenquimais semelhantes às apresentadas nesse experimento, mas Mazzetti et al (2010), cultivando células do tecido adiposo de coelhos em meio DMEM, conseguiram incrementar o rendimento em 77% após a segunda passagem no vigésimo dia. Resultados expressivos, porém tardios, pois a partir do décimo dia de cultivo já era possível descrever rendimentos equivalentes no presente estudo.…”

“…Na literatura consultada (Yanai et al 2005, Mazzetti et al 2010) não houve relato do uso de MesenCult ® na expansão de células obtidas da medula óssea de coelhos. Portanto, ainda que o meio não contenha componentes de origem animal, os resultados apresentados indicam a eficácia na metodologia, uma vez que o crescimento e o potencial celular de diferenciação foram mantidos.…”

A safety study on intrathecal delivery of autologous mesenchymal stromal cells in rabbits directly supporting Phase I human trials

“…10 scalpel, a 2‐ to 3‐cm incision through the skin was made in the dorsomedial line of the rostrodorsal region, and a 1 × 3‐cm sample of adipose tissue was excised from the adipose panicles. The skin was sutured with 3‐0 absorbable, synthetic suture (Vicryl, Ethicon, Inc., Somerville, NJ) …”

“…At 1 week, 1 × 10 7 cells were suspended in 200 μL of artificial CSF (a‐CSF; 119 mmol/L NaCl, 26.2 mmol/L NaHCO 3 , 2.5 mmol/L KCl, 1 mmol/L NaH 2 PO 4 , 1.3 mmol/L MgCl 2 , 10 mmol/L glucose) for injection. The remaining cell culture was stored frozen in fetal calf serum (Invitrogen) 10% dimethyl sulfoxide for future cell injections and characterization …”