A VP3/VP1 gene polymerase chain reaction assay for detection of chicken anemia virus in broiler samples

Abstract

A PCR assay was designed for amplification of the highly conserved VP3 gene and a 5' region of the VP1 gene, for the diagnosis of CAV in organ samples of broiler flocks suspected of chicken infectious anemia. A comparison of the VP3/VP1 PCR with in vivo virus isolation revealed 100% agreement of the results, with 13 positive and 3 negative samples in both assays, indicating that the VP3/VP1 PCR is a specific diagnostic method. Tissues from additional 24 broiler chicken flocks, with CAV-like lesions and clinical history were then tested only by the VP3/VP1 PCR and a reference PCR with published primers for the VP1 gene. Nineteen samples resulted positive and one negative in both PCR, while another 4 samples were positive only in the VP3/VP1 PCR. These results indicate that the VP3/VP1 PCR is a sensitive, specific diagnostic test, suitable as an alternative to the expensive and time consuming in vivo virus isolation method, specially considering the difficult diagnosis of CAV strains not readily adaptable to MSB-1 cell culture.

Broyler damızlık ve ticari broyler sürülerinde tavuk anemi virüsünün ve antikor varlığının araştırılması

“…Önceki araştırmalarda PCR testi için farklı hedef gen dizileri seçilmişse de, genellikle CAV'nin Cuxhaven-1 izolatının ORF1 ve ORF3 gen dizileri primer seçim bölgesi olarak tercih edilmiştir. Fakat bu primerlerin tüm izolatların PCR ile teşhisinde yeterli olmayacağı bildirilmiştir (9,13,21).…”

Clonagem e expressão da proteína VP3 do vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV)

“…Em 2005 foi publicado o trabalho que descreve o uso de um par de oligonucleotídeo que foi utilizado na amplificação de amostras brasileiras do CAV, o qual foi capaz de amplificar especificamente o fragmento de 713 pb do DNA viral, compreendendo o gene de VP3, 567 pares de base do gene de VP2 e 324 pares de base da região N-terminal de VP1. Este par de primer permitiu excelente amplificação do DNA do CAV para fins de diagnóstico e sequenciamento do DNA viral(NOGUEIRA et al, 2005) Soiné et al (1993). desenvolveram o "nested PCR" que consiste da reamplificação do produto resultante da primeira síntese enzimática, através do uso de oligonucleotídeos dirigidos para a região interna da seqüência amplificada.…”