Production and purification of epsilon prototoxin produced by Clostridium perfringens type D

Parreiras, Patrícia Martins; Lobato, Francisco Carlos Faria; Heneine, C.F.L.G.D.; Assis, Ronnie Antunes de; Balsamão, G.M.; Nascimento, Ricardo Aurélio Pinto

doi:10.1590/s0102-09352002000300019

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“…ETX was produced and purified according to the method described by Parreiras et al 6 Being the main producer of ETX and main causer of disease, C. perfringens type D strain was fermented in a bench bioreactor (BioFlo 110, New Brunswick Scientific C.O., UK) and concentrated 10 times using an ultrafiltration system with a 10 kDa membrane (Amicon, Beverly, USA). The toxin was purified by ion exchange chromatography (DEAE-Sepharose CL6B).…”

mentioning

confidence: 99%

Mapping of the continuous epitopes displayed on the Clostridium perfringens type D epsilon-toxin

Alves

Machado-de-Ávila

Chávez-Olórtegui

et al. 2017

Brazilian Journal of Microbiology

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Mapping of the continuous epitopes displayed on the Clostridium perfringens type D epsilon-toxin

Alves

Machado-de-Ávila

Chávez-Olórtegui

et al. 2017

Brazilian Journal of Microbiology

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“…Samples of C. perfringens type D, donated by the INTA -Argentina, were used for the production and purification of the epsilon prototoxin as described in Parreiras et al (2002) and Carvalho et al (2006).…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

Stability and toxicity of Clostridium perfringens type D epsilon prototoxin treated by iodine

Rocha¹,

Assis²,

Lobato³

et al. 2008

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

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Purified epsilon prototoxin of Clostridium perfringens type D was produced, purified, and detoxified by the stoiechiometric method of non-radioactive iodine incorporation. Different degrees of iodination were perfomed and the toxicity of the derivatives were analysed by in vivo studies. Toxicity decreased inversely to the iodine incorporation. Eletrophoretic analysis showed different levels of stability of samples kept under different temperatures 4ºC, -20ºC, and -80 ºC. The iodinated prototoxins were stocked for a period of four months.

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“…Essa toxina é secretada como protoxina e sua ativação ocorre após clivagem enzimática pela tripsina, resultando em um peptídeo de aproximadamente 31,2KDa, responsável pelas alterações patológicas observadas (PETIT et al, 1997 A soroneutralização em camundongos (SNC), técnica padrão empregada no diagnóstico da enterotoxemia, permite a detecção da toxina épsilon, tanto no conteúdo intestinal de animais acometidos (LOBATO et al, 2006), quanto em sobrenadantes de culturas de C. perfringens tipo D, utilizados na indústria e em centros de pesquisa (BRASIL, 1997). Apesar da reconhecida sensibilidade, esse bioensaio é demorado e relativamente caro, além de gerar inúmeras discussões éticas por parte de grupos humanitários e pesquisadores que buscam o bem-estar animal (PARREIRAS et al, 2002).…”

Section: Introductionunclassified

Padronização da titulação da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

et al. 2010

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Enterotoxemia, também chamada de doença do rim pulposo, doença que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela ação da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detecção e classificação dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutralização em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detecção e titulação dessa toxina in vitro e compará-lo ao fenômeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determinação da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titulação in vitro de diluições de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equação matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fenômeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equação matemática que apresenta uma correlação de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.

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Production and purification of epsilon prototoxin produced by Clostridium perfringens type D

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Mapping of the continuous epitopes displayed on the Clostridium perfringens type D epsilon-toxin

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Stability and toxicity of Clostridium perfringens type D epsilon prototoxin treated by iodine

Padronização da titulação da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

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