Cryopreservation of an avian spirochete strain in liquid nitrogen

Labruna, Marcelo B.; Resende, J.S.; Martins, N. R. S.; Jorge,

doi:10.1590/s0102-09351999000600008

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“…Para a obtenção de soro e carrapatos positivos para B. anserina utilizados na infecção dos Grupos 1 e 3, respectivamente, uma ave adulta livre de hemoparasitos foi imunossuprimida com acetato de metilprednisolona (Depo-Medrol ® ) (Souza 1998), administrado por via intramuscular, em dose única de 30mg/Kg. No dia seguinte a ave recebeu o inóculo de 0,5ml (Lisbôa et al 2009) de soro infectado com B. anserina já submetido a uma passagem previamente criopreservado em dimetil-sulfóxido (DMSO) a 10% (Labruna et al 1999). No quarto dia pós-inoculação (DPI), quando a ave apresentava pico de parasitemia, confirmado pela presença de inúmeras espiroquetas através da visualização do sangue em microscopia de campo escuro, foram coletadas amostras de soro infectado para o Grupo 1 e ninfas de segundo ínstar foram alimentadas até completo ingurgitamento para a obtenção de carrapatos infectados utilizados no Grupo 3.…”

Section: Methodsunclassified

Alterações bioquímicas, anatômicas e histopatológicas em fígado de Gallus gallus Linnaeus, 1758 experimentalmente infectados por Borrelia anserina Sakharoff, 1891

Cepeda

Baêta

et al. 2016

Pesq. Vet. Bras.

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Resumo: A espiroquetose aviária é uma enfermidade septicêmica de curso agudo, cosmopolita, que acomete diversas espécies aviárias, causada por Borrelia anserina e transmitida pelo carrapato Argas miniatus. O experimento teve como objetivos avaliar as alterações bioquímicas e anátomo-histopatológicas no fígado de Gallus gallus, causadas pela infecção experimental por B. anserina. Quarenta aves da espécie G. gallus foram divididas em quatro grupos inteiramente casualizados com 10 animais cada: G1 - inoculado com soro infectado com B. anserina; G2 - inoculado com soro fisiológico a 0,9%; G3 - exposto a ninfas de terceiro ínstar de A. miniatus infectados por B. anserina; G4 - exposto a ninfas de terceiro ínstar de A. miniatus livres de B. anserina. As aves dos Grupos 1 e 3 manifestaram no 3º e 6º dias pós-inoculação (DPI) respectivamente, sintomatologia característica da doença como inapetência, perda de peso, sonolência, diarreia esverdeada, mucosas hipocoradas, penas arrepiadas e hipertermia. Os níveis de ALT do Grupo 1 mostraram-se significativamente mais elevados apenas no 12ºDPI e 24ºDPI em relação ao seu grupo controle (Grupo 2) e no Grupo 3 esses níveis se mantiveram elevados até o 20º DPI em comparação ao seu grupo controle (Grupo 4). Os níveis da enzima AST pouco oscilaram nos grupos experimentais, embora tenham sido encontradas elevações no 12ºDPI nos Grupos 1 e 3. Os fígados das aves dos Grupos 1 e 3 apresentaram à necropsia, moderada hepatomegalia, congestão, superfície irregular e coloração vermelha a cianótica; constataram-se ainda pequenos pontos esbranquiçados na superfície. A histopatologia do fígado revelou congestão, infiltrados inflamatórios mononucleares, focos de necrose fibrinoide, dilatação dos sinusoides e vacuolização de hepatócitos. A coloração de Warthin-Starry revelou, nos fígados das aves dos Grupos 1 e 3, a presença de espiroquetas compatíveis com B. anserina, frequentemente no interior de vasos sanguíneos.

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Section: Methodsunclassified

Alterações bioquímicas, anatômicas e histopatológicas em fígado de Gallus gallus Linnaeus, 1758 experimentalmente infectados por Borrelia anserina Sakharoff, 1891

Cepeda

Baêta

et al. 2016

Pesq. Vet. Bras.

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“…A tick-borne acute septicemic disease that affects a variety of avian species is caused by the bacterium Borrelia anserina Sakharoff (1891). In Brazil, Labruna, Resende, Martins and Jorge (1999) reported an outbreak of B. anserina infection in chickens and demonstrated that a tick of the genus Argas is the biological transmitter. Avian borreliosis has previously been reported as an acute and severe illness that drastically affected the poultry industry and trade of many countries (Aragão 1911;El Nasri, Shigidi, & Mohammed, 2010;McNeil, Hinshaw, & Kissling, 1949).…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Experimental infection by Borrelia anserina strain PL in Gallus gallus

Cepeda

Cordeiro

Baêta

et al. 2021

Semina: Ciênc. Agrár.

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Avian borreliosis is a tick-borne acute septicemic disease that affects a variety of avian species and is caused by the bacterium Borrelia anserina. The present study aimed to establish the infection dynamics of B. anserina in experimentally infected Gallus gallus to determine its impact on the health and weight gain of the animals. Forty G. gallus were divided into four groups. Group 1 (G1) included 10 animals inoculated intramuscularly (IM) with 250μL of blood serum containing 3.7x106 spirochetes per milliliter. Group 2 (G2) included 10 animals inoculated IM with 250μL of saline 0.9%. Group 3 (G3) included 10 animals infested with four Argas miniatus nymphs (3rd instar) infected with B. anserina strain PL. Group 4 (G4) included 10 animals infested with four A. miniatus nymphs (3rd instar) free of infection by B. anserina. The number of spirochetes in the blood was directly proportional to the appearance of clinical signs and symptoms. This is the first study showing the experimental clinical evolution of the B. anserina PL strain in G. gallus. Additionally, the first assessments of spirochetaemia are presented, based on the direct count of bacteria in the serum by a Neubauer chamber, during the infection.

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“…Esse estudo trata-se do primeiro isolamento in vitro e caracterização molecular de uma cepa de B. anserina originária da América Latina. Anteriormente, a espiroquetose aviária foi relatada em alguns países dessa região (Argentina, Brasil, Guiana, Guadalupe e Martinique) (BOERO, 1957;KNOWLES et al, 1932;LABRUNA et al, 1999), mas o agente etiológico nunca foi caracterizado por ensaios sorológicos e moleculares.…”

Section: Discussionunclassified

“…A caracterização molecular e análise filogenético do presente trabalho, associados aos dados clínicos e epidemiológicos anteriormente descritos (LABRUNA et al, 1999) não deixam dúvidas de que a cepa de espiroqueta PL do Brasil é pertence a espécie B. anserina.…”

Section: Discussionunclassified

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Estudo de Borrelia spp. no Brasil

Ataliba¹

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Lyme disease is caused by bacteria belonging to the complex Borrelia burgdorferi sensu lato, which are transmitted by ticks of the Ixodes ricinus complex. The distribution of these bacteria are restricted to the northern hemisphere (North America, Europe, and Asia). Lyme disease-like cases have been reported in Brazil, but it is possible that another Borrelia species is involved in these cases, and ticks of the genus Amblyomma have been implicated as vectors. Due to these reasons, the disease in Brazil has been referred as Lyme Disease-Simile (LDS). Borrelia anserina, the agent of avian spirochetosis, has a wordwide distribution, where it is transmitted primarily by ticks of the genus Argas. The present study was divided in two chapters: the first one evaluated the presence of Borrelia spp in areas of the state of São Paulo where LDS have been reported. The second chapter reports the first in vitro isolation in BSK medium and molecular characterization of a spirochete strain from Brazil, presumably identified as B. anserina. For the first chapter, a total of 349 adult ticks (Amblyomma cajennense) collected in areas where LDS cases have been reported were processed. In addition, nine human blood or tissue samples from patients with clinical and serological diagnostic of LDS, two samples from BSK medium previously inoculated with samples of skin or blood of LDS patients, and three samples of BSK medium previously inoculated with tick samples were also processed. All these samples were processed for DNA extraction and then tested by nested-PCR employing primers targeting a portion of the flagelin B gene (flaB), which amplify a flaB fragment in all known Borrelia species. All samples were negative by this nested-PCR, showing no evidence of Borrelia sp in the tested samples. The second chapter evaluated an avian spirochete strain originated from Argas miniatus ticks from Pedro Leopoldo municipality, state of Minas Gerais. DNA fragments of the rrs (16S rRNA) and flab genes were amplified by PCR and sequenced to determine phylogenetic similarities. The resulting sequences were 99.8% (483 of 484) and 98.7% (754 of 764) similar to GenBank corresponding sequences of B. anserina rrs and flaB genes, respectively. By neighbor-joining phylogenetic analysis, the flaB sequence of the Brazilian strain clustered in a monophyletic group with the sequence of B. anserina under 100% bootstrap support. The isolate was successfully isolated in BSK medium, with seven passages performed. The spirochete crude antigen, fixed in glass slides, showed strong immunfluorescence reactivity with sera from chickens previously inoculated with the isolate. The spirochete strain isolated in the present study was genetically identified as B. anserina, labeled as strain PL.

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Cryopreservation of an avian spirochete strain in liquid nitrogen

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Alterações bioquímicas, anatômicas e histopatológicas em fígado de Gallus gallus Linnaeus, 1758 experimentalmente infectados por Borrelia anserina Sakharoff, 1891

Alterações bioquímicas, anatômicas e histopatológicas em fígado de Gallus gallus Linnaeus, 1758 experimentalmente infectados por Borrelia anserina Sakharoff, 1891

Experimental infection by Borrelia anserina strain PL in Gallus gallus

Estudo de Borrelia spp. no Brasil

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