Validação intralaboratorial de método para determinação de aflatoxina M1 em leite por cromatografia em camada delgada

Abstract

A aflatoxina M 1 é o principal metabólito hidroxilado da aflatoxina B 1 presente em leite de animais que ingeriram ração contaminada [17]. Esta toxina apresenta toxicidade semelhante à aflatoxina B 1 [29], além de potencial carcinogênico e genotóxico [8,36].Muitos estudos vêm sendo conduzidos para monitorar e controlar o desenvolvimento de fungos toxigênicos e a produção de micotoxinas em alimentos e rações, bem como desenvolver métodos de ensaio simples e eficientes para determinação destes metabólitos, avaliando as doses tó-xicas e limites máximos de tolerância para estas substâncias nos diversos produtos [3,15,26].Diante dos resultados obtidos, cada país tem tentado definir regulamentações, sendo considerados aspectos relacionados à saúde pública [3], políticos e econômi-cos [38]. A União Européia adotou o limite de tolerância máximo de 0,05µg/L para aflatoxina M 1 em leite fluido [5]. O regulamento técnico do MERCOSUL sobre limites máximos de aflatoxinas estipulou os níveis de 0,5µg/L e 5µg/kg para leite fluido e em pó, respectivamente [23], sendo estes os limites internalizados pelo Brasil [10].Com relação aos métodos de análise para controles eficientes de aflatoxina M 1 em leite são requeridos elevada sensibilidade, especificidade, precisão e exatidão, além de limites de detecção e quantificação suficientes para avaliação das baixas concentrações em que estas micotoxinas são encontradas [9,12,30,35].Os métodos para a determinação de aflatoxina M 1 em leite utilizam, em sua maioria, extração com solventes orgânicos e purificação cromatográfica em fase sóli-da ou imunoafinidade [11,18,20,22,27,31]. Tanto a cromatografia em camada delgada (CCD) como a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), constituem técnicas adequadas para separação, detecção e quantificação de aflatoxina M 1 em extratos de leite [37]. Embora a espectrometria de massas e a cromatografia lí-quida acoplada a espectrometria de massas tenham sido estudadas e sugeridas, estas técnicas ainda não são praticadas, possivelmente devido ao alto custo dos equipamentos e à necessidade de pessoal altamente capacitado [16]. Técnicas imunoquímicas, como enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), também têm sido amplamente utilizadas, principalmente em triagens [21,33]. Como a maioria das micotoxinas não são voláteis, a cromatografia gasosa apresenta limitações [19]. Entretanto, devido à multiplicidade de técnicas utilizadas RESUMOUm método para determinação de aflatoxina M 1 em leite empregando cromatografia em camada delgada foi otimizado e validado por procedimentos intralaboratoriais. Foram realizados testes para otimização das etapas de extração, purificação, detecção e quantificação por análise visual e densitométrica. Para validação do método foram realizados ensaios de recuperação com soluções padrões e amostras artificialmente contaminadas em níveis entre 0,027µg/L e 0,970µg/L. Foram avaliados linearidade, especificidade, exatidão, precisão, limites de detecção e quantificação. Os valores de porcentagem de recuperação na faixa de quantifi...

Desenvolvimento e validação de método analítico para a determinação de resíduos de cloranfenicol e pescado por CLAE-ESI/EM/EM

“…O método dos mínimos quadrados ordinários (MMQO) é consenso como ferramenta estatística para avaliação da linearidade. A maior parte das referências recomenda a estimativa dos parâmetros e dos resíduos (erros) da regressão, além da inspeção visual do gráfico x-y e do gráfico dos resíduos da regressão (SOUZA, 2007;GUIDI, 2010).…”

“…Como os estudos de validação são baseados em hipóteses estatísticas, uma verificação básica das premissas relacionadas aos testes estatísticos é fundamental para garantia de que os princípios destes testes não sejam afetados e para que os resultados obtidos sejam sustentados (THOMPSON, ELLISON & WOOD, 2002). Assim, previamente à realização de qualquer inferência, é necessário examinar as premissas para determinar se os dados são apropriados à aplicação dos testes (SOUZA, 2007).…”

“…= σ2 constante e desconhecida; ii) os resíduos são variáveis normalmente distribuídas ε ~ N (0, σ2); iii) os resíduos são homoscedásticos, com distribuição constante ao longo dos valores de Xi ; iv) o resíduo de uma observação εi não é correlacionado com o resíduo em outra observação εj , ou seja, cov (εi, εj) = 0, sendo i≠ j. Os resíduos não são apenas não correlacionados, mas independentes; e v) a relação entre Xi e Yi é linear (SOUZA, 2007;GUIDI, 2010).…”

“…No entanto, para substâncias com limites máximos estabelecidos, estes parâmetros não podem ser relacionados aos limites de detecção e quantificação, pois são expressos em relação aos limites (SOUZA, 2007).…”

“…A adequação do método de análise de cloranfenicol em pescado foi determinada com base nos resultados dos parâmetros linearidade, seletividade, efeitos de matriz, exatidão, precisão, limites de detecção e quantificação experimentais (SOUZA, 2007;GUIDI, 2010;BRASIL, 2011). Critérios de aceitabilidade foram determinados, conforme sugerido por SOUZA (2007).…”