In vitro modulation of alkaline phosphatase activity of Saccharomyces cerevisiae grown in low or high phosphate medium

Abstract

Our objective was to characterize the modulation of the activity of Saccharomyces cerevisiae alkaline phosphatases (ALPs) by classic inhibitors of ALP activity, cholesterol and steroid hormones, in order to identify catalytic similarities between yeast and mammalian ALPs. S. cerevisiae expresses two ALPs, coded for by the PHO8 and PHO13 genes. The product of the PHO8 gene is repressible by Pi in the medium. ALP activity from yeast (grown in low or high phosphate medium) homogenates was determined with p-nitrophenylphosphate as substrate, pH 10.4 (lPiALP or hPiALP, respectively). Activation of hPiALP was observed with 5 mM L-amino acids (L-homoarginine -186%, L-leucine -155% and L-phenylalanine -168%) and with 1 mM levamisole (122%; percentage values, in comparison to control, of recovered activity). EDTA (5 mM) and vanadate (1 mM) distinctly inhibited hPiALP (2 and 20%, respectively). L-homoarginine (5 mM) had a lower activating effect on lPiALP (166%) and was the strongest hPiALP activator. Corticosterone (5 mM) inhibited hPiALP to 90%, but no effect was observed in low phosphate medium. Cholesterol, ß-estradiol and progesterone also had different effects on lPiALP and hPiALP. A concentrationdependent activation of lPiALP minus hPiALP was evident with all three compounds, most especially with ß-estradiol and cholesterol. These results do not allow us to identify similarities of the behavior of S. cerevisiae ALPs and any of the mammalian ALPs but allow us to raise the hypothesis of differential regulation of S. cerevisiae ALPs by L-homoarginine, ß-estradiol and cholesterol and of using these compounds to discriminate between S. cerevisiae lPiALP and hPiALP.

Endosomal and AP-3-Dependent Vacuolar Trafficking Routes Make Additive Contributions to Candida albicans Hyphal Growth and Pathogenesis

“…Each strain was grown in YPD at 30°C overnight, and 5 ϫ 10 8 cells were harvested. Cell extracts were prepared using glass bead breakage, and ALP activity in the supernatant was determined using 4-nitrophenylphosphate as a substrate, to a final concentration of 0.8 mg ml Ϫ1 , as previously described (16). After a 30-min incubation at 37°C, the reaction was stopped with 100 mM NaOH and the OD 405 was determined.…”

Indução de ivermectina na hormese sobre Eisenia foetida durante a vermicompostagem de esterco bovino

“…Atributos químicos do vermicomposto após 28 dias de exposição a várias concentrações de ivermectina (IVM) desta classe estão envolvidas na diferenciação, na proliferação, na sinalização celular, na meiose, na mitose e na regulação da síntese do DNA, em diversos tipos de organimo (Fernandes et al, 2008).…”

Thành phần hóa học và hoạt tính tái tạo xương từ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat của cây Xương khỉ Clinacanthus nutans

“…ALP là một thành phần quan trọng trong quá trình hình thành mô cứng, biểu hiện cao ở sự khoáng hóa mô bào) cơ chế của enzym này chưa được hiểu hoàn toàn, nhưng nó tăng nồng độ trong cả hai giai đoạn tăng nồng độ cục bộ của chất vô cơ phốt phát, một chất xúc tác khoáng hóa, và để giảm nồng độ pyrophosphat ngoại bào, một chất ức chế của sự hình thành khoáng chất. Fernandes và cộng sự [16] và Koon [17] đã đưa ra một bằng chứng chỉ ra ALP thủy phân các cơ chất phốt phát giải phóng pi và liên quan đến việc bắt đầu quá trình khoáng hóa. Trong nghiên cứu này, chúng tôi phát hiện rằng lupeol có tác dụng kích thích hoạt động của ALP, cho thấy vai trò của nó trong quá trình khoáng hóa.…”