Abordagem citogenética e molecular em material de abortos espontâneos

Abstract

Rev Bras Ginecol Obstet. 2005; 27(9): 554-60 Artigos Originais RESUMO Objetivos: avaliar o desempenho da citogenética e das técnicas de hibridização in situ fluorescente (FISH) e reação em cadeia da polimerase (PCR) no estudo das aneuploidias cromossômicas numéricas e na determinação do sexo fetal em amostras de abortos espontâneos. Métodos: duzentos e dezenove amostras de produtos de abortos espontâneos foram submetidas a estudo citogenético. Deste total, 40 amostras foram também submetidas à técnica de PCR-nested para a determinação do sexo fetal: 32 foram selecionadas devido à falha de crescimento no estudo citogenético e oito foram escolhidas ao acaso. Vinte amostras foram selecionadas para detecção de aneuploidias cromossômicas pela técnica de FISH, utilizando-se sondas para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y: 13 casos foram submetidos a FISH devido à falha de crescimento no estudo citogenético e sete foram escolhidos ao acaso. Foi calculada a taxa de sucesso (obtenção de cariótipo) de cada técnica. Para comparação das taxas de sucesso foi utilizado o teste de χ 2 , sendo considerados significantes resultados com p<0,05. Foi avaliado o índice de acerto entre os resultados das amostras submetidas a mais de um exame, tomando-se como padrão-ouro o resultado do estudo citogenético. Resultados: houve crescimento celular em 84,9% das amostras submetidas a análise citogenética. Em 51,1% dos casos foram encontradas alterações cromossômicas: 65,2% trissomias, 17,9% triploidias, 9,4% tetraploidias, 4,2% monossomia do cromossomo X e 1,1% trissomia dupla, tetrassomia e alteração estrutural. A trissomia mais freqüente foi a do cromossomo 16 (39%). FISH e PCR tiveram taxa de sucesso de 90%, não diferindo significativamente do exame citogenético. Em todos os casos submetidos a mais de um exame os resultados foram concordantes. Nas amostras com falha de crescimento celular no exame citogenético e submetidas a outra técnica, a PCR obteve sucesso em 87,5% e a FISH em 84,6%. Conclusão: o estudo citogenético de restos ovulares de abortamentos espontâneos teve elevada taxa de sucesso e evidenciou anomalias cromossômicas em mais da metade dos casos. As técnicas de biologia molecular (PCR-nested e FISH) complementaram o estudo citogenético e permitiram a obtenção de resultados seguros na detecção de alterações cromossômicas numéricas e na determinação do sexo fetal. PALAVRAS-CHAVE:Aborto espontâneo/genética; Citogenética/métodos; Fluorescência em hibridização in situ; Reação em cadeia da polimerase ABSTRACT Purpose: to evaluate the performance of cytogenetic analysis, fluorescent in situ hybridization (FISH) and polymerase chain reaction (PCR) in the study of numerical chromosomal anomalies and in fetal sex determination of spontaneous abortion material. Methods: cytogenetic analysis was performed on 219 spontaneous abortion specimens. Forty of these cases were also submitted to fetal sex determination using nested-PCR. Thirty-two of these cases were selected due to failed cytogenetic culture and the other eight were selected random...

Molar Pregnancy: Genetic, Histological, Clinical Features and the Risk for Gestational Trophoblastic Neoplasia

“…In the first-trimester miscarriages, Triplody is one of the most common chromosome abnormalities present in 18% of first-trimester miscarrisges. [12,13]. The mechanism of genetic formation of the triploidy may result from fertilization of a normal haploid egg by two normal sperm or fertilization of a haploid egg by a diploid sperm.…”

“…The conventional karyotyping is the most used technique to identify the numerical and structural chromosomal abnormalities and confirms the presence of triploidy in HPM and diploidy in CHM. However, it cannot be used with formalinfixed paraffin-embedded or alcohol tissues, only in fresh samples [12,13,15]. Flow cytometry is a method for analyzing ploidy in fresh and paraffin-embedded samples.…”

“…Fluorescence in situ hybridization (FISH) is an indispensable technique in the study of the physical mapping of human genome because it allows a precise regional chromosomal location of single copy genes or repeated sequences of DNA. It can be used in paraffin-embedded samples, analyzes the ploidy and identifies the most common chromosomal abnormalities related to NM abortions according to the probes were used [12,19]. Molecular genotyping of microsatellites has been widely used in distinguishing HM.…”

Frequency of Chromosomal Abnormalities in Products of Conception: A Retrospective, Large-scale, Single-center study

“…The probe-based molecular diagnostic tests include fluorescence in situ hybridization (FISH), quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF-PCR), microarray and multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA). 4 The current study focused on identifying the frequency of chromosomal aberrations in POC samples. The study protocol was approved by an independent ethics committee.…”

Correlação cariótipo-genótipo-fenótipo de rearranjo cromossômico estrutural familiar envolvendo as regiões 4p e 12q

“…A diferença entre o número de concepções afetadas por anormalidades cromossômicas e o número de nascimentos, pode ser justificada pela severidade das alterações responsáveis pelo aumento da frequência de abortamentos espontâneos, óbitos fetais e natimortos. Os nascidos vivos, por sua vez, frequentemente apresentam alterações fenotípicas e malformações congênitas (MORAES et al, 2005;GAO et al, 2012).…”