Determinação simultânea de NADH e ácido ascórbico usando voltametria de onda quadrada com eletrodo de carbono vítreo e calibração multivariada

Abstract

Resumo: O método dos mínimos quadrados parciais (PLS) foi aplicado aos dados obtidos por voltametria de onda quadrada para a determinação simultânea de ácido ascórbico (AA) e do co-fator b-nicotinamida adenina dinucleotídeo (NADH) em misturas sintéticas. As curvas voltamétricas foram obtidas em tampão fosfato 0,2 mol L -1 (pH 8,0). Foi possível verificar que o método PLS permite a determinação destes compostos simultaneamente nas condições escolhidas. Os resultados mostraram um erro relativo máximo de 1,7% para o NADH e 2,1 % para o AA. A metodologia proposta é simples e desenvolvimentos posteriores podem torná-la útil para análises in vivo.Palavras-chave: NADH; ácido ascórbico; mínimos quadrados parciais (PLS); voltametria de onda quadrada. IntroduçãoO cofator b-nicotinamida adenina dinucleotídeo (NADH) é uma importante coenzima, tendo ação catalítica em mais de trezentos processos enzimáticos [1][2][3]. A detecção do NADH em fluidos biológicos é particularmente importante porque permite a determinação indireta de várias substâncias não-eletroativas presentes in vivo. Em virtude disso, um grande número de pesquisas visando o desenvolvimento de procedimentos analíticos para a determinação de NADH têm sido realizadas. Dentre os vários métodos existe um interesse particular para aqueles envolvendo a oxidação eletroquímica do NADH em meio aquoso [4].O NADH sofre oxidação para a produção de NAD + com perda de dois elétrons. O mecanismo desta oxidação é complexo, depende de sobrepotenciais de eletrodos elevados e o produto da oxidação pode bloquear a superfície do eletrodo, o que resulta em respostas pouco reprodutivas. Segundo dados da literatura, uma das formas de se melhorar a resposta eletroquímica de compostos como o NADH é pelo uso de catalisadores que acelerem a cinética de transferência de elétrons, ou via catálise heterogênea com o uso de eletrodos modificados e ainda reduzindo o sobrepotencial da reação trabalhando-se em valores mais altos de pH [4][5]. A aplicação de eletrodos modificados apresenta duas dificuldades importantes na detecção do NADH : a primeira é o bloqueio da superfície do eletrodo por produtos de oxidação que ocorre depois de pouco tempo da polarização do eletrodo e o segundo problema é a tendência em mediar a oxidação eletroquímica do ácido ascórbico (AA) que é o principal interferente presente em sistemas biológicos [4]. Dessa forma, estudos estão sendo realizados para produzir eletrodos modificados capazes de discriminar entre as reações de oxidação de NADH e AA e que sejam suficientemente imunes aos efeitos de adsorção. Alguns eletrodos modificados conseguem resolver o problema da interferência eletroquímica na determinação destes compostos, entretanto, este aumento na seletividade é acompanhado por uma

Prediction of the sensory acceptance of fruits by physical and physical–chemical parameters using multivariate models

“…These correspond to variances between reference data and values estimated by the model. Because studentized residual is defined in units of standard variance of the mean value, values above ±2.5 are considered high (Barthus, Mazo, & Poppi, 2005).…”

Efeitos de osmólitos na L- asparaginase II de <i>Erwinia chrysanthemi</i> em meio aquoso

“…Por outro lado, o estudo de OLSEN; RAMLØV e WESTH (2007) A cinética foi realizada pelo método espectrofotométrico acoplado à GDH que quantifica o NADH oxidado (SCHALK et al, 2014). O NADH é uma coenzima importante que apresenta ação catalítica em mais de 300 processos enzimáticos (BARTHUS;MAZO;POPPI, 2005). Na reação cinética, o NADH é oxidado para NAD + com a perda de dois elétrons, e este último é quantificado no ensaio.…”

Desenvolvimento de método cromatográfico para determinação de ingredientes ativos de formulações fotoprotetoras e uso da fluorescência de raios-x para a determinação do fator de proteção solar

“…Valores de resíduos altos significam que o modelo não está conseguindo modelar os dados de forma adequada. O resíduo de Student é utilizado para se obter a influência de cada amostra em particular (BARTHUS et al, 2005).…”