O desafio de analisar solutos básicos por cromatografia líquida em modo reverso: algumas alternativas para melhorar as separações

Abstract

. This review considers some of the difficulties encountered with the analysis of basic solutes using reversed-phase chromatography, such as detrimental interaction with stationary phase silanol groups. Methods of overcoming these problems in reversed-phase separations, by judicious selection of the stationary phase and mobile phase conditions, are discussed. Developments to improve the chemical and thermal stability of stationary phases are also reviewed. It is shown that substantial progress has been made in the manufacturing of stationary phases, enabling their use over a wide variety of experimental conditions. In addition, general measures to significantly extend their lifespan are discussed.Keywords: reversed-phase stationary phases; column classification; chemical and thermal stability. INTRODUÇÃOA cromatografia líquida (LC, liquid chromatography) tem ampla aceitação como técnica analítica, sendo utilizada em muitas áreas da ciência. O modo mais usado desta técnica é o modo reverso (RP-LC, reversed phase liquid chromatography) devido às suas inúmeras vantagens, tais como uso de fases móveis de menor custo e menor toxicidade; rápido equilíbrio da coluna após a mudança de fase mó-vel; possibilidade da condução de separações no modo de eluição por gradiente, resultando em maior rapidez e melhor separação nas análises; boa repetibilidade dos tempos de retenção; amplo campo de aplicação, devido à possibilidade de separação de compostos de diferentes polaridades, massas molares e funcionalidades, dentre outras. 1,2 Por sua vez, mais de 70% dos fármacos disponíveis no mercado são bases e a RP-LC é a técnica mais utilizada para analisar solutos básicos, 1,3 mas alguns problemas acontecem quando solutos básicos são analisados por RP-LC e, por esta razão, esta revisão se dedica a apresentar estes problemas e a fornecer algumas alternativas para superá-los, contribuindo com outras revisões produzidas pelo nosso grupo de pesquisa a respeito da RP-LC. [4][5][6][7][8][9] Em RP-LC o principal objetivo é obter separação dos solutos, que é avaliada através da resolução (R s ), que determinada o grau de separação entre dois picos adjacentes. A resolução pode ser expressa em função da eficiência (N 2 ), da seletividade (α) e do fator de retenção do segundo pico (k 2 ), com a aproximação de que ambos os picos têm aproximadamente a mesma largura à meia altura. De acordo com a equação o aumento do fator de retenção resulta em melhores resoluções apenas quando os solutos forem pouco retidos (fatores de retenção menores que 1) e fatores de retenção maiores que 10 aproximam o termo da equação (k/k+1) à unidade. Enquanto dobrar a eficiência da separação resulta em um aumento da resolução de √ -2 (41%), um aumento na seletividade de 1,05 para 1,10 faz com que a resolução aumente em duas vezes. Desta forma existem duas maneiras de se aumentar a resolução: aumentar a eficiência e aumentar a seletividade da separação. 10 É interessante ressaltar que, ao longo deste texto, serão discutidas alternativas para se alterar a retenção dos so...

Development and validation of an isocratic HPLC method for simultaneous determination of quaternary mixtures of antihypertensive drugs in pharmaceutical formulations

“…Unfortunately, it was not possible to obtain complete and efficient peak separation. Considering drug ionization [27,28], the pH of the methanol-water (80:20, v/v) mixture was adjusted to 3.0, using phosphoric acid. This improved the peak separation of the drugs, although the resolution of atenolol and furosemide continued to be insufficient.…”

Stability-indicating HPLC-DAD method for the simultaneous determination of fluoroquinolones and corticosteroids in ophthalmic formulations

“…The use of a buffered mobile phase is dispensable because the proposed pH value was at least 2 units below the pK a values of both drugs, providing completely ionized secondary alkylamine groups. 63 DEXA and PRED have high pK a values (12.42 and 12.58, respectively) 60 and they are poorly soluble in polar solvents. 2 DEXA and PRED were more retained in the stationary phase when mobile phases composed of a larger amount of water (mobile phase D) were used, and when acetonitrile was substituted for methanol (mobile phase E), as shown in Table 2.…”

MDMA Electrochemical Determination and Behavior at Carbon Screen‐printed Electrodes: Cheap Tools for Forensic Applications

“…Indeed, the small population of protonated amine groups when the pH is above 10.14 may result in more energy necessity for MDMA electrolysis and do not provide a peak with good resolution in our conditions. In addition, organic solvents may change the pKa of basic molecules [43] such as MDMA, commercialized in methanol, which could provide other MDMA fingerprints that are not seen. The range of pH studied is large enough to agree that one peak behavior due to the utilization of the SPE.…”