Determinação de heparina fracionada em preparações farmacêuticas utilizando turbidimetria

Abstract

Recebido em 17/7/10; aceito em 5/12/10; publicado na web em 29/3/11 DETERMINATION OF FRACTIONATED HEPARIN IN PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS USING TURBIDIMETRY. A turbidimetric method has been used for quantification of fractionated heparin (FH) in pharmaceutical dosage. The UV detection at two wavelengths (290 and 500 nm) showed a significant increase in sensitivity of the method, specificity, and linearity to range 5.0-50.0 μg mL -1 and 50.0-200.0 μg mL, respectively (r < 0.99). At both wavelengths, the method was precise (inter-assay CV < 5.0%, and intra-assay CV < 3.0%), accurate (maximum deviation of ± 12%), and robust to the parameters evaluated. Turbidimetry proved to be easy, inexpensive and relatively fast. The results obtained attest to the reliability of the method.Keywords: fractionated heparin; quantitative analysis; turbidimetry. INTRODUÇÃOA heparina é o anticoagulante mais utilizado mundialmente há mais de 50 anos no tratamento e profilaxia da trombose venosa profunda (TVP) e de sua principal complicação, a embolia pulmonar. Constitui o segundo fármaco natural mais utilizado no mundo, superado apenas pela insulina.1 Trata-se de uma glicosaminoglicana composta de cadeias de resíduos alternados de D-glicosaminoglicana e um ácido urônico. Sua molécula é sulfatada, ácida e carregada negativamente. 2-4As heparinas fracionadas (HFs) são obtidas a partir da heparina extraída da mucosa intestinal de suínos por degradação química ou enzimática. [5][6][7] Dentre as HFs disponíveis, a enoxaparina sódica (Figura 1) é a mais estudada e tem sido veiculada em muitas formas farmacêuticas de uso parenteral. Algumas estão disponíveis no mercado como Enoxil ® (Prodotti), Dripanina ® (Ariston) e Clexane ® (Sanofi). Nos últimos anos é crescente o número de pesquisas objetivando o desenvolvimento de novos sistemas de liberação para otimização da terapia. Assim, o desenvolvimento de métodos para o doseamento da HF é bastante relevante.Diversos métodos analíticos têm sido desenvolvidos para avaliar e quantificar as glicosaminoglicanas incluindo as heparinas. Entretanto, os estudos são dirigidos para a determinação das várias sequências sacarídicas que compõem a molécula e utilizam técnicas como ressonância magnética nuclear, espectrometria de massas e sistemas eletroforéticos. [8][9][10][11][12][13] Estes métodos são trabalhosos e se tornam inviáveis para a quantificação da heparina em formas farmacêuticas, pois envolvem processos de derivatização, incluindo a utilização de enzimas e a cromatografia de exclusão para a separação das diferentes frações sacarídicas. A United States Pharmacopeial Convention publicou em 2008 uma monografia atualizada para a HF, porém não descreve metodologia menos laboriosa. Outras formas encontradas para a análise quantitativa da HF são os métodos nefelométrico, descrito por Ardry, 14 e turbidimétrico utilizado em trabalhos mais recentes. 15-17A turbidimetria é uma técnica relacionada à colorimetria, capaz de medir a turbidez de uma amostra, e possui aplicação restrita à quantificação de substân...