Voltametria de Pulso Diferencial (VPD) em estado sólido de manchas de Cromatografia de Camada Delgada (CCD): um novo método de análise para fitoativos antioxidantes

Abstract

Recebido em 17/3/10; aceito em 3/8/10; publicado na web em 30/11/10 SOLID STATE DIFFERENTIAL PULSE VOLTAMMETRY (DPV) FROM SPOTS OF THIN LAYER CHROMATOGRAPHY (TLC): A NEW METHOD FOR ANALYSIS OF ANTIOXIDANT PHYTOACTIVES. A new electroanalytical method coupling TLC-DPV in solid state was developed for quantitative determination of phytoantioxidants with medicinal purpose, e.g. rosmarinic acid (RA) in samples of phytopharmaceuticals, e.g. rosemary (Rosmarinus officinalis L.). The method showed to be feasible, presenting linearity in concentrations ranging from 0.694 x 10 -3 to 9.526 x 10 -3 mol L -1 (r = 0.9945), good sensibility, selectivity, reproducibility, repeatability, agility and affordable cost. The concentrations of RA in different extracts of rosemary ranged from 0.05 to 0.52 (% w/w), presenting high recovery levels when compared to HPLC.Keywords: chemically modified electrodes; rosmarinic acid; TLC-DPV. INTRODUÇÃOO ácido rosmarínico (AR) é um éster dos ácidos cafeico e 3,4-di-hidroxifenilato, comum nas Boragináceas e na subfamília Nepetoideae das Lamiáceas. 1 Inúmeras atividades biológicas vêm sendo atribuídas a esse marcador, como propriedades antidepressiva, 2 hepatoprotetora, 3 anti-inflamatória, 4 antiangiogênica, 5 antitumoral, 6 antiretroviral 7 e antimutagênica. 8 Além disso, é reconhecido como um dos mais potentes fitoativos antioxidantes, 9 o que justifica uma gama de aplicações, incluindo produtos que vão de conservantes de alimentos e cosméticos, até medicamentos. 10 A identificação e quantificação de marcadores vegetais importantes como o AR garantem autenticidade e qualidade às matérias-primas vegetais e, no caso dos fitoantioxidantes, a eficácia do produto. 11 Neste contexto, a análise quantitativa do AR tem sido realizada por meio de métodos cromatográficos demorados e onerosos 12,13 e o desenvolvimento de métodos mais rápidos, com baixo custo e que também apresentem menor impacto ambiental, tem sido alvo de vários estudos. 14 Os métodos eletroanalíticos pertencem a um grupo de métodos analíticos quantitativos que se baseiam nas propriedades elétricas de uma solução contendo a espécie de interesse (analito) quando este faz parte de uma célula eletroquímica. Assim, a transferência de elétrons ocorre na superfície do eletrodo, sendo dependente do meio da solução eletrolítica e do material do eletrodo. De modo geral, apresentam características analíticas adequadas, como viabilidade, boa seletividade, exatidão, alta sensibilidade, assim como baixos custo e impacto ambiental (baixo consumo de reagentes). 11,15 Dentre as técnicas mais difundidas destacam-se as voltametrias cíclicas e de pulso diferencial, 11,15 coulometria e ambas as técnicas acopladas ou indiretas. 11 Deste modo, os métodos eletroquímicos apresentam grande aplicabilidade analítica ao estudo dos fitoantioxidantes, já que estes são espécies eletroativas. Estes métodos são, em geral, mais seletivos e sensíveis que os métodos espectrométricos e mais reprodutíveis que os métodos biológicos, como xantina oxidase e peroxidação lipídica...

Redox Behaviour of Verbascoside and Rosmarinic Acid

“…Considering the cyclic voltammetry results, the global oxidation reaction involves a reversible four electron transfer mechanism. Moreover, the low oxidation potential of all electrode reaction steps it is in agreement with the high antioxidant activity exhibited by both compounds [4,7].…”

“…The global market of natural products is driven by health and anti-aging products, which in most cases play an essential role against oxidative stress [1][2][3][4]. The antioxidant activity of many natural compounds has gained great attention due to their promising biological relevance.…”

“…Among these compounds, flavonoids and hydroxycinnamic acid derivatives, such as rosmarinic acid (RA) and verbacoside (VB) (Scheme 1), are of particular interest due to their widespread occurrence in fruits and vegetables consumed by humans [1][2][3][4]. Due to their inherent antioxidant power, they have received considerable attention [2,[5][6][7], and pharmacological studies of RA and VB have reported a large variety of important biological properties, such as anti-inflammatory, antibacterial, anticonvulsant, antitumour, anti-viral, anticancer, antibacterial as well as being good UV screeners, by inhibition and conversion of ultraviolet light into harmless low energy radiation, thus preventing tissue damage [7][8][9][10][11][12][13][14][15].…”

“…Structurally, it is an ester of caffeic acid (CA) (Scheme 1), with 3,4-dihydroxyphenyl lactic acid (DHPLA), thus having two electroactive catechol moieties, which are able to neutralize free radicals by an electron/proton donor mechanism. Furthermore, the hydroxyl and carboxyl oxygen confer good metal-chelating properties to RA [3,4]. VB, also named as acteoside, is another hydroxycinnamic ester derivative widely distributed in plants, including diverse medicinal herbs, such as echinacea, lemon verbena (Aloysia triphylla), mullein (Verbascum Thapsus), Indian warrior (Pedicularis densiflora), savannah tea (Lippia multiflora) [8,[16][17][18][19], and olive fruits [5,9,20,21].…”

“…In pharmaceutical technology, the combination of watersoluble and organic-soluble antioxidants is common practice, also being important in physiological systems, by preserving lipid membranes and cytosolic compartments from attack by free radicals [22]. In innovative cosmetic products, natural antioxidants of vegetable origin with different watersolubility levels, such as RA and VB, are now used as a functional ingredient [2,4,7].…”