2.2.1 Δείγματα 2.2.2 Δοκιμή υγρών θρεπτικών μέσων για την καλύτερη ανάπτυξη των βλαστικών κυττάρων του Β. thuringiensis 35 2.2.3 Εκχύλιση των πολυπεπτιδίων των βλαστικών κυττάρων του Β. thuringiensis μετά από κατεργασία τους με σακχαρόζη (27,5 %) και λυσοζύμη (lOmgml 1 ) 2.2.4 Εκχύλιση των πολυπεπτιδίων από κύτταρα του Β. thuringiensis σε διαφορετικές τιμές της οπτικής πυκνότητας της καλλιέργειας 2.2.5 Ανάπτυξη υγρής καλλιέργειας του Β. thuringiensis για την ηλεκτροφόρηση των πολυπεπτιδίων του 39 2.2.6 Ηλεκτροφόρηση των πολυπεπτιδίων του Β. thuringiensis σε πηκτή SDS-πολυακρυλαμίδης (SDS-PAGE). 2.2.7 Σύγκριση των πολυπεπτιδικών προτύπων δειγμάτων του Β. thuringiensis και ομαδοποίηση τους 41 3. ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑΚΟΥ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟΥ ΣΤΕΛΕΧΩΝ ΚΑΙ 2.2.2 Πολυπεπτιδικό πρότυπο του Β. thuringiensis σε διαφορετικές πυκνότητες της καλλιέργειας .63 2.2.3 Σταθερότητα των πολυπεπτιδικών προτύπων 63 2.2.4 Σύγκριση των πολυπεπτιδικών προτύπων των δειγμάτων του Β. thuringiensis 63 3. ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΑΙΑΚΟΥ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟΥ ΣΤΕΛΕΧΩΝ ΚΑΙ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ TOY BACILLUS THURINGIENSIS ΑΠΟ ΤΟΝ ΕΛΛΑΔΙΚΟ ΧΩΡΟ 71 3.1 Ποικιλλότητα του πλασμιδιακού περιεχομένου στελεχών του Β. thuringiensis 71 3.2 Μελέτη των πλασμιδίων διαφορετικών στελεχών με παρόμοιο πλασμιδιακό πρότυπο 71 3.3 Μελετητών πλασμιδίων δειγμάτων του ιδίου στελέχους. 77 3.4 Εκχύλιση DNA από πηκτή αγαρόζης 83 ΚΕΦΑΛΑΙΟ IV. ΣΥΖΗΤΗΣΗ 85 ΚΕΦΑΛΑΙΟ V. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ 93 ΚΕΦΑΛΑΙΟ VI. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 102 Το γένος των βακτηρίων Bacillus αποτελεί μια ομάδα κατά Gram θετικών, ραβδόμορφων, αερόβιων βακτηρίων που παράγουν ενδοσπόρια (Claus και Berkeley 1986). Ο βάκιλλος του είδους thuringiensis απομονώθηκε για πρώτη φορά από ασθενείς προνύμφες μεταξοσκώληκα στην Ιαπωνία, στις αρχές του αιώνα. Το όνομα του το πήρε από την περιοχή της Θουριγγίας στη Γερμανία, απ' όπου απομονώθηκε μια δεκαετία αργότερα (Van Frankenhuyzen 1993, Claus και Berkeley 1986. To Bacillus thuringiensis χαρακτηρίζεται από την παραγωγή, κατά τη σπορίωσή του, ενδοκυτταρικών παρασποριακών εγκλείστων κρυσταλλικής μορφής (κρυστάλλων), οι οποίοι περιέχουν πρωτεΐνες που εμφανίζουν εξειδικευμένη τοξική δράση σε μεγάλο φάσμα εντόμων καθώς και σε άλλα ασπόνδυλα (Van Frankenhuyzen 1993, Borgonie κ. ά. 1995. Πολλά από τα έντομα αυτά (κυρίως λεπιδόπτερα, δίπτερα και κολεόπτερα) βλάπτουν σημαντικές καλλιέργειες, όπως το βαμβάκι, το καλαμπόκι, την πατάτα, τον καπνό, πολλά λαχανικά, οπωροφόρα, καθώς επίσης και τα δέντρα των δασών (Navon 1993). Άλλα πάλι αποτελούν φορείς σημαντικών ασθενειών του ανθρώπου, όπως η ελονοσία, ο κίτρινος πυρετός και η φιλαρίαση και απειλούν περισσότερα από 3 δισεκατομμύρια ανθρώπων στις τροπικές και υποτροπικές χώρες. Οι σημαντικότεροι από αυτούς τους φορείς, τα κουνούπια, ευθύνονται για 100 εκατομμύρια μολύνσεις και περίπου 1 εκατομμύριο θανάτους το χρόνο από ελονοσία (Becker και Margalit 1993).Στη συνέχεια περιγράφονται η μορφολογία, οι βιοχημικές ιδιότητες και ο κύκλος ζωής του Β. thuringiensis, τα παρασποριακά του έγκλειστα, τα γονίδια των πρωτεϊνών των κρυστάλλων του, η δομή και ο τρόπος δράσης τους, η χρή...