Rapid detection by transmission electron microscopy of mycoplasma contamination in sera and cell cultures

Barth, Ortrud Monika; Majerowicz, Selma

doi:10.1590/s0074-02761988000100009

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“…For decades, TEM has become the technique of choice for researchers worldwide to observe biological specimens and cellular morphologies. [47][48][49][50] In terms of techniques, sample preparation methods, such as heavy metal staining, chemical fixation, resin-embedding, and thin-sectioning, have been ac-066803-2 tively developed to promote this scientific visual inspection procedure. [51][52][53][54][55] Nowadays, a significant part of knowledge of the organizations of the cell comes from this method, which widens our scope of view in structural biology in cells.…”

Section: Sample Preparation For Cryo-etmentioning

confidence: 99%

Cryo-ET bridges the gap between cell biology and structural biophysics

Cheng¹,

Wang²,

Shen

2018

Chinese Phys. B

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Cryo-electron tomography (cryo-ET) is a cutting-edge technology providing three-dimensional in situ ultra-structural information of macromolecular machineries, organelles, and eukaryotic cells in their native environment at an unprecedented level of detail. Cryo-ET enables the direct observation of dynamic macromolecular architectures of bio-samples in their naturally occurring physiological state, without any harmful artifacts introduced by heavy metal staining, dehydration, and chemical fixation, which occur in traditional transmission electron microscopy. Over decades, cryo-ET has been providing insights into numerous aspects of cellular biology by revealing the pristinely preserved ultra-structures of different cellular components comprising the crowded and complex environment of the cell, thus, bridging the gap between cellular biology and structural biophysics. In this paper, we review the fundamentals of this technique, its recent advances in optics, detection devices, and computational algorithms. The enhancement of our understanding of structural cellular biology by combining these improvements, when integrated with other methods, such as cryo-focused ion beam milling, correlative light and electron microscopy, is discussed via a few examples from research groups worldwide. We also believe that cryo-ET applications in cell biology continue to provide fundamental insights into the field, revolutionizing structural biology itself.

show abstract

Section: Sample Preparation For Cryo-etmentioning

confidence: 99%

Cryo-ET bridges the gap between cell biology and structural biophysics

Cheng¹,

Wang²,

Shen

2018

Chinese Phys. B

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show abstract

“…Timenetsky (1990) 15 , através de provas diferenciais (bioquímicas), identificou Acholeplasma laidlawii em 88,23% de 17 linhagens celulares pesquisadas. Apesar desses dados 3,11,15 não terem sido confirmados sorologicamente, as evidências parecem indicar que contaminações de culturas celulares, no Brasil, são freqüentes e dignas de avaliação. …”

unclassified

Identificação de micoplasmas pela inibição de crescimento de amostras isoladas de culturas celulares

et al. 1992

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TIMENETSKY, J. et al. Identificação de micoplasmas pela inibição de crescimento de amostras isoladas de culturas celulares, Rev. Saúde públ., S.Paulo, 26 (1): 17 -20 , 1992.As culturas celulares devem ser continuamente monitoradas quanto à presença de micoplasmas, pois, embora às vezes eles passem despercebidos, podem causar alterações cromossômicas, interferir na replicação viral, na produção de anticorpos e interferon. A Organização Internacional em Micoplasmologia (IOM) recomenda o isolamento e a identificação de micoplasmas, visando detectar as prováveis origens da infecção e melhorar a qualidade das culturas. Assim, foram analisadas pela inibição de crescimento, 37 amostras pertencentes a 27 linhagens celulares contaminadas por micoplasmas. Em nenhuma amostra foi observada a ocorrência de duas espécies. Foram identificados 18 (48,65%) Mycoplasma arginini, 15 (40,55%) Acholeplasma laidlawii, dois (5,40%) Mycoplasma orale, sendo que duas amostras (5,40%) não foram identificadas. Considerando as espécies caracterizadas na pesquisa, os autores sugerem: a) a adoção do teste de isolamento de micoplasmas em caráter de rotina; b) o aprimoramento das técnicas de assepsia e desinfecção; c) a eliminação da pipetagem bucal; d) a utilização de soros e de outros componentes de meios de cultura de qualidade certificada; e) o questionamento da presença de micoplasmas quando linhagens celulares são permutadas pelas instituições; f) a avaliação cautelosa de resultados obtidos quando se utilizam culturas infectadas por esse microrganismo. IntroduçãoAtualmente, culturas celulares não têm seu uso restrito à Virologia, sendo utilizadas em diversas áreas da pesquisa biomédica. Por constituírem sistema biológico sensível a agentes físicos, quí-micos e infecciosos, devem apresentar-se íntegras, de modo a não prejudicarem os ensaios laboratoriais. O monitoramento das culturas celulares deve ser permanente e incluir a pesquisa de micoplasmas porque estes microrganismos são capazes de provocar alterações citogenéticas 6,7,8,10 . Com a produção, permuta e comercialização de culturas celulares, inicialmente isentas de micoplasmas, nem sempre é possível assegurar que eles continuem ausentes, pois, com a sucessão de repiques, a transposição do microrganismo para elas, às vezes, é inevitável. O soro animal, por exemplo, mesmo após passar através de membranas filtrantes com porosidade de 0,22 um, pode conter micoplasmas, já que estes, sob determinadas condições fisiológicas, atravessam os poros 8,10,15 . As taxas de infecção por micoplasma em culturas celulares variam de acordo com os fatores interferentes na manipulação, existentes em cada laboratório. Assim, 15% de infecção não constituem freqüência inesperada 1,6,10 . No Brasil, Barth e Majerowicz (1988) 3 detectaram micoplasma através da microscopia eletrôni-ca, em soros e culturas celulares, enquanto que Miyaki e col. (1989) , através de cultivo direto, verificaram a presença de Mycoplasma sp. em 45,28% de 106 culturas celulares examinadas. Timenetsky (1990) 15 , através de provas d...

show abstract

Mycoplasma, Actinomyces, and Nocardia

Maglaras¹,

Koenig²

2015

Small Animal Critical Care Medicine

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Rapid detection by transmission electron microscopy of mycoplasma contamination in sera and cell cultures

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Cryo-ET bridges the gap between cell biology and structural biophysics

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Identificação de micoplasmas pela inibição de crescimento de amostras isoladas de culturas celulares

Mycoplasma, Actinomyces, and Nocardia

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