Leishmania braziliensis: isolation of carbohydrate-containing antigen and possibility of its use in the immunodiagnosis of American Cutaneous Leishmaniasis

Abstract

Leishmania braziliensis is a causative agent of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). The 034-JCG strain, isolated from a patient from the northern region of Paraná State, Brazil, was cultivated in Blood Agar Base medium, lyophilized and submitted to phenol-water extraction. The extract was treated with RNase I. The carbohydrate containing-antigen (Ag-CHO) was immunogenic to rabbits and showed at least a fraction with some negative charge at pH 8.2. This antigen showed cross-reactivity with the phenol-water extract of the growth medium used for the culture of promastigotes and with the surface antigens of promastigotes. Its composition is: 24.3% of total sugars, from which 11.2% of galactose, 7.5% of mannose and 5.6% of ribose. Protein content was 5.4% and phosphate 18.5%. The antigenic activity was maintained after: repeated freezing-thawing; lyophilization; heating at 100ºC for 30 minutes; treatment with RNase, trichloroacetic acid and sodium metaperiodate. The precipitin line obtained is Periodic Acid Schiff positive. The application of the Ag-CHO in counterimmunoelectrophoresis reaction for the immunodiagnosis of ACL showed 60% sensitivity, and no cross-reaction with the five sera of Chagas' disease patients tested. The use of this antigen in a more sensitive technique, with more samples of sera, may improve these results.

High levels of serum glycans monovalent IgG immune complexes detected by dissociative ELISA in experimental visceral leishmaniasis

“…Our search of low‐molecular‐weight antigens in PSE by sequential molecular exclusion chromatography revealed glycans (950–1800 MW) probably with 6–13 sugar residues by MALDI‐TOF. The presence of antigenic glycans is described in other studies involving Leishmania sp …”

“…The presence of antigenic glycans is described in other studies involving Leishmania sp. 24,25 The antigenicity of glycan haptens and their application in diagnostic methods in VL is little explored; references to glycans are generally in studies on the development of vaccines and related to the structural composition of molecules present in amastigote and promastigote forms and their impact on the immune response. 26 Conjugation of glycans to carrier molecules is a usual tool for the immobilization of these antigens on solid supports and is used in tests for antibody detection.…”

Detecção de antígenos circulantes como abordagem diagnóstica em leishmaniose visceral.

“…A presença de carboidratos antigênicos de Leishmania ssp. está relatada na literatura (Silveira, Kemmelmeier, 1995;Mukhpadhyay, Mandal, 2006;Datta et al, 2015). A reatividade específica de anticorpos anti-leishmania à carboidratos foi demonstrada em estudo que avaliou o potencial antigênico de carboidratos de Leishmania braziliensis (Silveira, Kemmlmeier, 1995 (Hommel et al, 1978).…”

“…Outra abordagem para a utilização de carboidratos antigênicos em diagnóstico foi realizada também para o diagnóstico da leishmaniose cutânea usando como método diagnóstico a reação de contraimunoeletroforese, porém os resultados apresentaram baixos índices de sensibilidade e a análise permitiu aos autores sugerirem a utilização desse tipo de antígeno em técnicas com maior sensibilidade como melhor opção para estudos posteriores (Silveira, Kemmelmeier, 1995). A presença de carboidratos antigênicos na LV foi relatada em estudo anterior, que assim como o nosso realizou a caracterização de carboidratos usando experimentos de oxidação e biotinilação específica, os resultados de captura desses antígenos em amostras de urina de pacientes doentes mostram que o mesmo é altamente específico para o diagnóstico da doença (Sarkari et al, 2002).…”

Avaliação dos desfechos de infecção in vitro e em modelo experimental no hamster com diferentes isolados clínicos de Leishmania infantum

“…A presença de glicanas em antígenos de Leishmania foi relatado em estudos para desenvolvimento de diagnósticos e de adjuvantes para vacinas (SILVEIRA; KEMMELMEIER, 1995;OSANYA et al, 2011). Desta forma nós testamos a eficiência do tratamento do antígeno com a enzima GlycINATOR Endo S2 LE 2000 unidades (Genovis, Cambridge, USA) para a remoção das glicanas; afim de usar o antígeno posteriormente na técnica Enzyme-linked lectin assay (ELLA), com lectinas biotinilados específicas para detectar carboidratos na superfície de glicoproteínas (GORNIK; LAUC, 2007;THOMPSON et al, 2011).…”