Detecção da citotoxicidade de materiais biocompatíveis nas linhagens celulares MRC-5, HeLa e RC-IAL

Abstract

A sensibilidade de uma linhagem celular diplóide e duas heteroplóides, para a detecção de citotoxicidade através do método de difusão em camada de ágar sobre culturas celulares, foi avaliada experimentalmente com solução de ácido ascórbico em diferentes concentrações e, na prática, frente a 562 amostras de 21 diferentes materiais industriais enviados para análise na Seção de Culturas Celulares do Instituto Adolfo Lutz. A linhagem celular heteroplóide designada RC-IAL apresentou, em relação às linhagens MRC-5 e HeLa, maior sensibilidade porque revelou a presença de efeito citotóxico nas menores concentrações utilizadas (10 e 25 ug/ml) do ácido ascórbico e apresentou maior diâmetro do halo citotóxico em 15 amostras e igual diâmetro em 16 das 43 amostras (7,6%) que resultaram positivas. Nas 43 amostras positivas, a linhagem MRC-5 não revelou citotoxicidade em 3 amostras de espuma e 1 de resina acrílica. O polivinilcloreto (PVC) e o polietileno, raramente revelaram positividade, enquanto plástico, algodão e resinas acrílicas revelaram citotoxicidade ao redor de 5%. Em vista dos resultados é discutida a proposta da utilização da linhagem RC-IAL e HeLa para a continuidade das futuras análises solicitadas ao Instituto Adolfo Lutz

Comparação de métodos para testar a citotoxicidade "in vitro" de materiais biocompatíveis

“…A linhagem celular RC-IAL apresentou maior sensibilidade frente aos materiais testados em ambos métodos usados (Tabela 2), pois foi observado maior efeito citotóxico, isto é, maior halo de difusão (mm) ou maior percentagem de células mortas (+) quando comparado aos resultados obtidos com a linhagem celular HeLa, confirmando outros resultados obtidos anteriormente 6,7 .…”

“…Entretanto, em trabalho anterior 7 , foi manifestado, pelos resultados obtidos em pequeno (7) e grande (562) número de amostras, o melhor desempenho da linhagem RC-IAL no método de difusão em ágar frente às linhagens celulares HeLa e MRC-5 (pulmão de feto humano) e, experimentalmente, frente ao ácido ascórbico, outra substância conhecidamente tóxica.…”

“…Para esta avaliação foram utilizadas, como substrato, duas linhagens celulares RC-IAL (linhagem de células fibroblásticas de rim de coelho) e HeLa (linhagem de células epiteliais de carcinoma de colo de útero humano), que após estudos realizados 6,7 foram eleitas por apresentarem maior sensibilidade nos testes de citotoxicidade "in vitro".…”

Análogos de micosporinas: síntese e avaliação de parâmetros farmacológicos e toxicológicos

“…Como método de avaliação laboratorial da extensão desta agressão, encontramos os testes de citotoxicidade e fototoxicidade "in vitro", cujo reconhecimento pelos órgãos internacionais como a FDA e a OECD, favoreceu a substituição dos ensaios que utilizavam animais de laboratório (Huggett et al, 1996;Cruz et al, 1998). Nesses ensaios, as culturas celulares primárias são as que oferecem maior sensibilidade aos materiais tóxicos, porém, o uso de linhagens celulares contínuas apresenta uma série de vantagens por proporcionarem populações celulares mais homogêneas e possibilitarem a propagação contínua (Cruz et al, 1992;OECD, 2004) 2.…”

Avaliação de metodologia alternativa in vitro ao teste de irritação ocular de Draize

“…A câmara e ante-câmara eram em alvenaria, com piso em granilite, cantos arredondados, dispondo a câmara de bancadas de trabalho em aço inoxidável.Os testes foram realizados empregando técnicas assépticas, fazendose uso de luvas, toucas, aventais e máscaras cirúrgicas estéreis.As células foram cultivadas em garrafas de Roux contendo meio mínimo de Eagle com 10% de soro fetal bovino inativado, em estufa a 36 ± 1DC, por 48 horas. Para a preparação do meio de Eagle empregou-se água destilada, posteriormente submetida à purificação em aparelho Milli-Q PluS®.A adição do soro fetal bovino ocorreu após sua inativação a 56 D C por 1 hora.O meio contendo o soro sofreu esterilização por filtração através de membranas de porosidade de 1,2~m; 0,8~m; 0,45~m e 0,22~m, consecutivamente, precedidas por um pré-filtro(82).Após o descarte do meio de crescimento, as células cultivadas em garrafas de Roux foram dispersas utilizando uma associação de tripisina 0,20% e versene a 0,02% e suspensas no mesmo meio de cultura, sendo que desta suspensão foram pipetados, para as placas de Petri descartáveis de 60 mm de diâmetro, um volume de 5 mL contendo cerca de 10 5 total de 6 placas por amostra(32,93,94,37,38,80).Após a formação do tapete celular e a avaliação microscópica da morfologia das células confirmando suas características, procedeu-se ao descarte do meio de crescimento, substituído por meio sólido de manutenção constituído de partes iguais do meio de Eagle duas vezes concentrado, sem soro fetal bovino, e de uma solução de agar a 1,8% contendo 0,01 % de vermelho neutro. A fusão do agar em solução aquosa do indicador precedeu a mistura das partes constituintes do meio de manutenção e foi feita no momento do uso, estando ambos a uma temperatura de 44°C.…”