Considerações críticas e metodológicas na determinação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio em células musculares durante contrações

Abstract

Arq Bras Endocrinol Metab vol 48 nº 6 Dezembro 2004 812 RESUMOUma excessiva produção de espécies reativas pode ser prejudicial, superando a capacidade antioxidante e conduzindo a um desequilíbrio redox. A maioria das evidências da formação de espécies reativas em células musculares são "indiretas", ao passo que as evidências "diretas" ainda são escassas. As razões para este fato são múltiplas. Esta revisão sugere a utilização de sondas fluorescentes como DCFH (reativa ao H 2 O 2 ) , DAF-2 (reativa ao NO) e fluoróforo nitróxido (reativa ao O 2 · -) para determinação dessas espécies. Em adição, o presente estudo sugere que: 1) as medidas "indiretas" de ataque oxidativo em amostras sangüíneas não necessariamente refletem o ataque oxidativo ocorrido nas células musculares; 2) amostras de músculos isolados e homogenatos podem apresentar uma grande quantidade de tecido vascular contendo células endoteliais, hemácias e leucócitos, os quais podem gerar EROs e NO, dificultando a interpretação dos resultados; 3) as sondas fluorescentes DCFH-DA/DCFH, DAF-2-DA/DAF-2 e nitróxido são sensíveis na detecção do H 2 O 2 , NO e O 2 · -respectivamente, em tecido muscular durante contrações; 4) como método alternativo no estudo da produção de EROs e NO em músculo esquelético, culturas de células musculares e fibra muscular isolada são indicados como modelos experimentais.

Regulação do metabolismo de glicose e ácido graxo no músculo esquelético durante exercício físico

“…Nosso grupo tem mostrado que, durante a contração muscular intensa, a produção de EROs é substancialmente elevada no músculo esquelético (8), um efeito mediado pelo consumo elevado de oxigênio mitocondrial (31,15). A mitocôndria, um importante sítio gerador de EROs durante a atividade muscular, pode também ser vulnerável às ações dessas espécies (32,33).…”

Oxidative metabolism and muscle biochemical profile of polo horses supplemented with an ADE vitamin complex

“…The high oxygen consumption by mitochondria during intense muscle contraction increases ROS production in skeletal muscle (Silveira 2004). The ROS superoxide has been described as a potent inhibitor of aconitase, an enzyme that contributes to the substrate input for the Krebs cycle.…”

“…The ROS superoxide has been described as a potent inhibitor of aconitase, an enzyme that contributes to the substrate input for the Krebs cycle. As a consequence of this inhibition, the availability of NADH and FADH2 for the mitochondrial electron transport chain is reduced, thereby compromising ATP synthesis (Silveira 2004). This mechanism may favor glycolytic activity and increase the production of lactate/H+.…”

Avaliação dos efeitos antiinflamatórios da proteína antagonista de receptor de interleucina - 1 (IRAP) por citometria de fluxo em líquido sinovial de eqüino

“…Ressalta-se que, apesar de resultados divergentes no tocante à especificidade do DCFH pelo H 2 O 2 (BASS et al, 1983;RAO et al, 1992;WALRAND et al, 2003;KIM et al, 2006;SOH, 2006), resultados in vitro evidenciaram uma baixa especificidade pelos demais radicais (SILVEIRA, 2004).…”

“…Não obstante a ampla variedade de métodos baseados na citometria de fluxo para avaliar simultaneamente a fagocitose e o metabolismo oxidativo de células humanas (SILVEIRA, 2004;SOH, 2006) também já empregados para a avaliação da resposta imune de eqüinos (FLAMINIO et al, 2002;MASSOCO;PALERMO NETO, 2003), somente um estudo foi realizado empregando-o para analisar leucócitos do líquido sinovial de eqüinos (MASSOCO et al, 2006). Este estudo demonstra a viabilidade da técnica de citometria de fluxo em quantificar a produção das EROs proveniente das células do líquido sinovial nesta espécie (MASSOCO et al, 2006).…”