Silenciamento de genes com RNA interferência: um novo instrumento para investigação da fisiologia e fisiopatologia do córtex adrenal

Abstract

. Loss-of-function approaches such as gene knock-out or gene silencing are extremely powerful strategies for assigning function to a gene and for mapping the interconnections of intracellular regulatory pathways. Post-transcriptional gene silencing can be obtained via activation of a double-stranded RNA (dsRNA) mediated mechanism termed RNA interference (RNAi). RNAi has revealed an extremely versatile tool in Biomedical research that can be used in both single silencing gene experiments and in large-scale Functional Genomics studies and has been used as a tool for gene therapy. In the present paper the authors discuss the intracellular mechanisms underlying the RNAi phenomenon, as well the different strategies and their limitations for RNAi gene silencing in mammalian cells. The use of RNAi in the treatment of human diseases and in the investigation of both physiology and pathophysiology of adrenal cortex has also been reviewed.

Clonagem molecular do oncogene EZH2 de leucemia mieloide crônica e perspectivas terapêuticas

“…Na área da saúde ela contribui de forma efetiva para o diagnóstico, tratamento e o estudo de diversas doenças, tendo como uma das ferramentas principais de trabalho a tecnologia do DNA recombinante, uma vez que permite a produção de biofármacos, o desenvolvimento de vacinas de DNA, a produção de reagentes para diagnóstico, o estudo da proteômica e o estabelecimento de novas terapias, como a terapia molecular ou gênica e a terapia celular 1,3 . A farmacologia busca a cada dia, desenvolver fármacos que resultem em uma terapêutica efetiva e com menos efeitos colaterais, e para isso têm tido como alvo moléculas específicas (citocinas, quimiocinas, fatores de transcrição e moléculas expressas na superfície celular) que tenham papel funcional na patogênese das doenças 4 . Neste contexto, a terapia gênica, que consiste na transferência de material genético para as células de um indivíduo com objetivo terapêutico, é uma alternativa biotecnológica promissora para restabelecer as respostas celulares normais de uma célula.…”

“…O RNAi é um mecanismo celular de regulação genética que suprime a expressão de um gene a partir de moléculas de RNA dupla fita (RNAdf) complementares a um RNA mensageiro alvo (RNAm alvo) 7,8 . Naturalmente esse mecanismo tem por função combater RNA's anômalos, transposons e vírus em organismos eucariotos 9 . Pelo mesmo mecanismo, a introdução de moléculas de RNAdf sintetizadas in vitro pode inibir um oncogene e reverter a apoptose em células tumorais 10 .…”

Uso do silenciamento gênico mediado por RNA de interferência e de TAL effector nucleases para aumento de eventos gene targeting em células de cão

“…RNA interferência (RNAi) é um mecanismo de silenciamento gênico através de RNA dupla fita (dsRNA). Foi descoberto no nematelminto Caenorhabditis elegans e hoje já foi observado em plantas, fungos, protozoários, insetos e mamíferos (FIRE et al 1998;HUNTER, 1999;BARBOSA;LIN, 2004;LUO et al, 2012), ocorrendo somente em células eucarióticas.…”

“…Alguns estudos comprovaram que o silenciamento de alguns genes podem levar as células a preferirem a RH em detrimento da mais frequente JPNH (DELACOTÊ et al, 2011). O RNA de interferência é uma técnica bastante utilizada para esse objetivo, já que proporciona grande inibição da tradução gênica por período limitado (BARBOSA; LIN, 2004;BERTONILI et al, 2009), permitido que o gene targeting seja facilitado, mas evitando possíveis efeitos deletérios da inibição prolongada.…”

“…LANGER;ANDERSON, 2009), com a inibição perdurando por 3 a 5 ciclos de replicação celular (BARBOSA; LIN, 2004) com a sua duração variando de acordo com o ritmo de divisão celular (WHITEHEAD; LANGER;ANDERSON, 2009). O mecanismo de RNA interferência, por gerar fenótipo de perda-de-função, vem sendo bastante utilizado em estudos de função e identificação gênica(HUNTER, 1999;BARBOSA;LIN, 2004;LIU et al, 2009; ). Pesquisas com doenças hereditárias de caráter…”