Estudo comparativo das diferentes técnicas empregadas na contagem diferencial de leucócitos no leite

Abstract

RESUMO: A contagem de células somáticas (CCS) é um parâmetro amplamente utilizado para monitorar a saúde do úbere e a qualidade do leite, porém não diferencia as distintas populações leucocitárias. Portanto, a diferenciação das populações celulares no leite pode aprimorar o diagnóstico da mastite bovina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar as diferentes técnicas de contagem diferencial de leucócitos no leite para diagnosticar precisamente a mastite. Para tal, foram utilizadas 31 vacas da raça holandesa preta e branca em lactação (124 quartos mamários). Foram empregadas a contagem automática de células somáticas, e a contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação, contagem diferencial de leucócitos por esfregaço direto, e citometria de fluxo com a utilização de anticorpos monoclonais específicos para identificação de cada população leucocitária. Os resultados demonstraram correlação positiva e significativa entre a proporção de leucócitos polimorfonucleares pelas diferentes técnicas e a contagem automática de células somáticas, sendo observada uma correlação discretamente mais forte com a citometria de fluxo. Além disso, foi demonstrado que os macrófagos são a população predominante no leite oriundo de glândula mamária com baixa CCS. Observaram-se também diferenças na proporção das distintas populações leucocitárias entre as distintas técnicas, resultado da possível subjetividade do examinador na contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação e contagem microscópica direta por esfregaços, o que reforça que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta confiável no controle e diagnóstico da mastite.

Immune response in nonspecific mastitis: What can it tell us?

“…Differential cell counts can be obtained by light microscopy and flow cytometry. Nonetheless, the accuracy of flow cytometry is related to the difficulty in differentiating cell populations by light microscopy and the much higher number of cells per sample that are analyzed by flow cytometry (Koess and Hamann, 2008;Pilla et al, 2013;Takano et al, 2018). Still, even using flow cytometry, the mAb used can affect the DCC outcomes.…”

“…Although there is no consensus on the main leukocyte population in healthy mammary quarters (Dosogne et al, 2003;Schwarz et al, 2011;Pilla et al, 2012;Pilla et al, 2013;Blagitz et al, 2015a;Takano et al, 2018), our study strengthens the idea that milk monocytes/macrophages represent the major leukocyte population in healthy mammary gland, as previously proposed (Sarikaya et al, 2004(Sarikaya et al, , 2005Merle et al, 2007;Damm et al, 2017;Gonçalves et al, 2017). In contrast to our results, Dosogne et al (2003), Schwarz et al (2011), andPilla et al (2012) described that lymphocytes represent the predominant cell population, which counterposes the higher percentage of monocyte/macrophages in healthy mammary glands and higher percentage of T cells (CD3 + ) and CD8 + T lymphocytes in the truly infected quarters from our study.…”

“…Briefly, 2 × 10 5 viable milk cells were incubated with 100 µL of heat-killed, PI-labeled S. aureus for 30 min at 37°C. Thereafter, 2 mL of 3 mM EDTA was added to substantially decrease the number of adherent bacteria to the leukocyte membrane that could be mistakenly be recognized as ingested (Batista et al, 2018), and after centrifugation at 400 × g for 10 min at 4°C, the leukocytes were resuspended in 300 µL of PBS and examined by flow cytometry (FACSCalibur, BD Bioscience, San Jose, CA). An unstained control and single stained samples were also prepared as compensation controls.…”

“…Somatic cell count measures all somatic cells in milk; nevertheless, it does not distinguish the different cell populations present. Thus, it has been proposed that differential cell counting (DCC) could provide a more reliable inflammatory status of the mammary gland (Pyörälä, 2003;Koess and Hamann, 2008;Takano et al, 2018).…”

Milk Macrophage Function in Bovine Leukemia Virus-Infected Dairy Cows

“…Infection by BLV also negatively impacts the culling rate of dairy cattle, and AL animals may show decreased productivity and profitability (18). Thus, these findings raised questions about the effects of BLV on mammary gland immunity, in which macrophages are the main population present in milk from health mammary glands (19)(20)(21)(22)(23)(24), thus being the first defense cells to come into contact with the pathogen that causes mastitis.…”