AbstrakPerkembangan penyakit pada manusia saat ini semakin beragam dan berjalan relatif cepat. Salah satu penyebab timbulnya berbagai penyakit tersebut yaitu mikroorganisme seperti bakteri Escherichia coli. Pengobatan yang biasa dilakukan masyarakat yaitu menggunakan obat-obatan kimia, yang dapat menimbulkan efek resisten pada bakteri bahkan efek samping bagi pasien, sehingga penting untuk dilakukan usaha pemanfaatan tanaman sebagai bahan obat herbal dengan memanfaatkan limbah biji buah jeruk manis sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri biji jeruk (Citrus sinensis) terhadap bakteri Escherichia coli. Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratorium dengan menggunakan metode difusi untuk uji aktivitas antibakterinya. Penelitian dilakukan dengan tahapan sebagai berikut: (1) preparasi sampel berupa serbuk biji jeruk, (2) maserasi serbuk biji jeruk dengan pelarut n-heksana dan etanol, (3) uji antibakteri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa biji jeruk menghambat pertumbuhan bakteri E.coli dengan zona hambat ekstrak n-heksan dan etanol sebesar 7,93±1,90 mm dan 18,27±2,40 mm. Biji jeruk manis (Citrus sinensis) memiliki potensi sebagai antibakteri. AbstractDevelopment of disease in humans is increasingly diverse and runs quickly. One cause of the incidence of various diseases are microorganisms such as Escherichia coli. The usual treatment is the use of chemical drugs, which can cause the effects of resistance to bacteria and even side effects for patients, so it is important to do business utilization of plants as herbal medicinal materials by utilizing the waste of sweet orange seeds as an antibacterial. This study aims to determine the antibacterial activity of orange seeds (Citrus sinensis) against Escherichia coli. This study is designed as an laboratory experimental with diffusion method for the antibactey test. The study was conducted with the following stages: (1) preparation of the sample of orange seed powder, (2) maseration of orange seeds powder with n-hexane and ethanol solvent, (3) antibacterial test. The results showed that orange seeds inhibited the growth of Escherichia coli with inhibition zone of n-hexane and ethanol extracts of 7.93±1.90 mm and 18.27±2.40 mm. Sweet orange seeds (Citrus sinensis) have the potential as antibacterial.