Разработка Пробиотика Для Аквакультур На Основе Bacillus Toyonensis B-13249 И B. Pumilus B-13250

Abstract

ВведениеПри промышленном разведении креветок, ракообразных и других представителей аквакультуры фермеры часто встречаются с различными инфекциями объектов производства и, как следствие, массовой смертностью водных животных. К болезнетворным микроорганизмам в водной среде относятся представители р. Vibrio [1], Salmonella, Escherichia coli [2] и многие др. Для предотвращения крупных потерь при выращивании промысловых объектов, долгие годы применялись антибиотики, что со временем приводило к развитию генов резистентности к ним у большинства микроорганизмов. Чтобы устойчивость бактерий к антибиотикам не привела к экологической катастрофе, стоит задача поиска более безопасных способов борьбы с патогенными организмами. В связи с этим производители аквакультуры все чаще используют пробиотики в качестве профилактики и комплексном лечении инфекционных заболеваний [3].Цель работы -разработать пробиотик для аквакультуры на основе штаммов рода Bacillus. Материалы и методыВ качестве объекта исследования при разработке пробиотика использовали 2 штамма споровых бактерий из коллекции ИЦ «Промбиотех» АлтГУ: B. toyonensis В-13249 выделенный из ризосферы р. Helianthus, B. pumilus В-13250 -из ризосферы р. Cichorium. Для проведения промышленных испытаний пробиотика использовали цисты жаброногого рачка A. fraciscana двух партий ООО «Арсал». Испытания по проценту выклева и выходу биомассы артемий проводились на базе лаборатории ООО «Арсал», г. Яровое (Алтайский край, РФ). Еще одним объектом для испытаний были пресноводные креветки Розенберга. Испытания проводили на частной ферме, расположенной в Республике Казахстан. Использовали потомство самки M. rosenbergii, разделенное на 2 группы: контрольную и опытную [4]. Для восстановления культур, контроля численности и чистоты использовали следующие среды и реактивы: физиологический раствор, L(Лурия) -среда, жидкий L-бульон, Эндо. При глубинном культивировании микроорганизмов в ферментерах использовали среды: глюкозопептонно-дрожжевая (ГПД [1]), пшеничная (ПС [5]), мелассно-кукурузная бедная (МК-БС, собственная разработка), мелассно-кукурузная обогащенная (МК-ОС [6], защитная (криопротекторная) на основе желатина и сахарозы [7].Антагонистическую активность штаммов оценивали методом отсроченного антагонизма перпендикулярных штрихов. В качестве антагонистов использовали исследуемые штаммы B. toyonensis и B. pumilus, в качестве тест-культур -патогенные и условно-патогенные штаммы из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.Антибиотикорезистентность исследуемых штаммов определяли диско-диффузионным методом на твердой L-среде [8].Условия культивирования в биореакторах. Технологию производства биологического препарата отрабатывали на производственной площадке ИЦ «Промбиотех» АлтГУ. Промышленное глубинное культивирование производили в ферментерах 15 и 250 л объемом (ООО «Сторге», Россия).Методы инкубации цист рачков A. franciscana. Цисты инкубировали в конусах в течение 48 ч при соответствующих параметрах промышленного разведения артемии. Опыт состоял из 4 вариантов для каждой из партий цист ...