Μελέτη του ρόλου του NF-kB στην απόπτωση κυττάρων που εκτίθενται σε παράγοντες οξειδωτικού στρες και σε κυτταροκίνες

Abstract

ηος πόλος ηος NF-κB ζηην απόπηωζη κςηηάπων πος εκηίθενηαι ζε παπάγονηερ επαγωγήρ οξειδωηικού ζηπερ και ζε κςηηαποκίνερ». ΦΖΚΑ ΑΛΔΞΑΝΓΡΟ ΒΙΟΛΟΓΟ ΓΗΓΑΚΣΟΡΗΚΖ ΓΗΑΣΡΗΒΖ ΙΩΑΝΝΙΝΑ, 2009 Κεθάιαην Γεύηεξν: Τιηθά-Μέζνδνη 66 2.1 ΤΛΙΚΑ …………………………………………………………………………..67 2.2 Βαηηδνζαηέξ Σεπκζηέξ …………………………………………………………69 2.3 Κοηηανζηή ηαθθζένβεζα ………………………………………………………..74 2.4 Πνμζδζμνζζιυξ ημο ηοηηανζημφ ηφηθμο ιε ηοηηανμιεηνία νμήξ …………79 2.5 Πνμζδζμνζζιυξ απμπηςηζηχκ ηαζ δεοηενεουκηςξ κεηνςηζηχκ ηοηηάνςκ ιε ηοηηανμιεηνία νμήξ ……………………………………………………………80 2.6 Υμνήβδζδ Η 2 Ο 2 ζε ηφηηανα Α549 …………………………………………..80 2.7 Υμνήβδζδ εημπμζζδίμο/VP-16 ζε ηφηηανα Α549 ηαζ MRC5-TERT ……..81 2.8 Υμνήβδζδ ηοημελαιίδζμο (CHX) ζε ηφηηανα Α549 ………………………..81 2.9 Υμνήβδζδ TNFα ζε ηφηηανα Α549…………………………………………..81 2.10 Πνμζδζμνζζιυξ ηςκ εκδμβεκχκ επζπέδςκ ΓΜΟ ζε ηφηηανα Α549 ηαζ MRC5-TERT………………………………………………………………………. 82 2.11 Ακάθοζδ ιε βμκίδζμ ακαθμνάξ NF-ηB θμοζζθενάζδξ…………………... 82 2.12 Έιιεζμξ ακμζμθεμνζζιυξ ηαζ ζοκεζηζαηή ιζηνμζημπία………………. 83 2.13 Απμιυκςζδ ηαζ Ακάθοζδ Νμοηθεσηχκ μλέςκ…………………………... 83 2.14 Απμιυκςζδ ηαζ Ακάθοζδ Πνςηεσκχκ……………………………………. 87 2.15 Απμιυκςζδ μθζημφ RNA…………………………………………………... 95 2.16 Ακηίδναζδ ακηίζηνμθδξ ηνακζηνζπηάζδξ/πμθοιενάζδξ [ Reverse transcriptase/polymerase chain reaction (RTPCR)]…………………………... 96 2.17 Δζζαβςβή βμκζδίςκ ζε ηφηηανα εδθαζηζηχκ…………………………….. 97 Κεθάιαην Σξίην: Απνηειέζκαηα 105 Μέξνο Πξώην: Ο ξόινο ηνπ NF-θB ζηηο απνθξίζεηο ησλ θπηηάξσλ ζην νμεηδσηηθό ζηξεο πνπ επάγεηαη από ην H 2 O 2 ……………………………106 3.1 Η πμνήβδζδ H 2 O 2 είπε ςξ απμηέθεζια ηδ ζοζζχνεοζδ ηςκ εκδμβεκχκ επζπέδςκ ΓΜΟ ηαζ εηηίκδζε ιζα απυηνζζδ ζε αθάαεξ ζημ DNA………… 107 3.2 Η πμνήβδζδ H 2 O 2 ακέζηεζθε ημκ ηοηηανζηυ πμθθαπθαζζαζιυ ηαζ επήβαβε ηδ ζοζζχνεοζδ ηςκ ηοηηάνςκ Α549 ζηδ G2-M θάζδ ημο ηοηηανζημφ ηφηθμο ……………………………………………………………………………………109