Three Phase Partitioning: Concentration and Purification of Proteins

Affinity-Based Strategies for Protein Purification

“…From undergraduate chemistry, we know that water-soluble organic solvents separate out as a different phase in the presence of salt (30). If a protein is present in a solution of ammonium sulfate in water and tert-butanol is added, three phases result: the upper tert-butanol phase, the lower aqueous phase, and a precipitate of protein at the interface (31). Although the mechanism of this TPP is far from clear, the technique matches the more well known two-phase affinity extraction in simplicity, scalability, and ability to deal with unclarified feed.…”

New Functions of the Thylakoid Membrane Proteome of Arabidopsis thaliana Revealed by a Simple, Fast, and Versatile Fractionation Strategy

“…To identify additional integral membrane proteins or proteins that are tightly bound to the thylakoid via lipid anchors or short helical structures parallel to the membrane plane, we specifically developed a new fractionation protocol based on a so-called "three-phase partitioning" technique using t-butyl alcohol, originally successfully developed for soluble proteins (21). These TPP protocols were adapted here to membrane proteins using salt-stripped thylakoid membranes as our target proteome (Fig.…”

“…Low speed centrifugation will induce an interphase with precipitated proteins above the aqueous phase because butanol bound to proteins increases their buoyancy (21). The precipitated proteins are largely free of salts and are easy to resuspend.…”

Separation of Lactoferrin From Whey in Three-Phase Extraction Systems (Tpp Method)

“…Fazy górne składały się głównie z tert-butanolu, stąd ewentualnie znajdująca się w nich laktoferyna wymagałaby skomplikowanych i kosztownych zabiegów zmierzających do oddzielenia jej od tert-butanolu. Zwykle fazy górne (zwane fazami organicznymi) zawierające tert-butanol nie są brane pod uwagę i analizowane [4,30] jako frakcje zawierające lipofilne zanieczyszczenia ekstraktów [7]. Przeprowadzona analiza zawartości laktoferyny w fazach górnych po usunięciu tert-butanolu (za pomocą chromatografii sitowej i suszenia sublimacyjnego) potwierdziła, że fazy te praktycznie nie zawierały laktoferyny, a tym samym nie występował problem strat tego białka wynikający z jego migracji.…”

“…Np. albumina surowicy wołowej w układach trójfazowych była wytrącana w fazie środkowej z maksymalną wydajnością w środowisku o pH niższym niż punkt izoelektryczny [7]. Zupełnie inną zależność badanych parametrów ekstrakcji od pH stwierdzono w fazach dolnych.…”