Technical validation of a polymerase chain reaction for Chlamydia trachomatis detection

Abstract

Objetivo: Implementar una técnica de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) para la detección de Chlamydia trachomatis. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio experimental en el que se estandarizaron las condiciones de PCR (Concentración de MgCl2 , Taq polimerasa y temperatura de alineamiento de cebadores) para la amplificación de una región de 201pb del plásmido de C. trachomatis con los cebadores CtP1 5´-TAGTAACTGCCACTTCATCA-3´ y CtP2 5´- TTCCCCTTGTAATTCGTTGC-3. Se realizaron diluciones seriadas del ADN de C. trachomatis ATCC VR885D para determinar la sensibilidad analítica. La especificidad analítica de los cebadores se determinó con ADN de diferentes microorganismos patógenos y comensales del tracto urogenital. Se determinó la variabilidad intra e interensayo de la PCR sobre triplicados de diferentes muestras de ADN. Resultados: Las condiciones de amplificación fueron 94°C/4 min, seguido de 40 ciclos a 94°C/1 min, 56°C/1 min y 72°C/1.5 min y extensión final de 72°C/4 min. La concentración óptima de MgCl2 fue 1.5 mM y de ADN polimerasa 1U. La sensibilidad analítica de la prueba fue 4.8 x10-15g/mL de ADN equivalentes a 160 cuerpos elementales de C. trachomatis. La especificidad analítica fue 100% y la variabilidad intra e interensayo mostraron reproducibilidad de la PCR. Conclusiones: Los datos sugieren que esta PCR puede emplearse con fines diagnósticos. Se requieren estudios adicionales para la evaluación clínica de esta prueba.