Simultaneous assessment of plasmatic, acrosomal, and mitochondrial membranes in ram sperm by fluorescent probes

Abstract

In this experiment, it was defined a protocol of fluorescent probes combination: propidium iodide (PI), fluorescein isothiocyanate-conjugated Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA), and JC-1. For this purpose, four ejaculates from three different rams (n=12), all showing motility 80% and abnormal morphology 10%, were diluted in TALP medium and split into two aliquots. One of the aliquots was flash frozen and thawed in three continuous cycles, to induce damage in cellular membranes and to disturb mitochondrial function. Three treatments were prepared with the following fixed ratios of fresh semen:flash frozen semen: 0:100 (T0), 50:50 (T50), and 100:0 (T100). Samples were stained in the proposal protocol and evaluated by epifluorescence microscopy. For plasmatic membrane integrity, detected by PI probe, it was obtained the equation

Eficiência dos diluidores Tris e Botu-crio® sobre os parâmetros seminais de garanhões das raças quarto de milha e mangalarga marchador

“…Outra alíquota de 10 µL foi destinada à análise da integridade da membrana plasmática, além da integridade do acrossoma e a funcionalidade mitocondrial por meio de sondas fluorescentes, segundo metodologia descrita por Celeghini et al 12 . Em relação ao potencial de membrana mitocondrial, o presente trabalho constatou valores que estão de acordo com os achados por Oliveira et al 17 , que não verificaram diferenças significativas entre os diluidores à base de amidas e EDTA-LACTOSE.…”

Criopreservação do sêmen ovino com incorporação de colesterol por ciclodextrina

“…Nas espécies domésticas, as avaliações espermáticas pelo uso de sondas fluorescentes tem tido cada vez mais destaque CELEGHINI et al, 2007CELEGHINI et al, , 2010.…”

“…As lecitinas, que se ligam a resíduos glucosídicos em diferentes partes da membrana acrossomal, têm sido usadas com essa finalidade, em uma grande variedade de espécies. As aglutininas do Pisum sativum (ervilha) (PSA) (TAO et al, 1993;CELEGHINI et al, 2010) e do Arachis hypogaea (amendoim) (PNA) (TAO et al, 1993;NAGY et al, 2003) têm sido as lectinas mais utilizadas para esse fim, por causa de sua especificidade.…”

“…Fonte: (BATISSACO, 2014) 7.2.2.2 Análises da membrana plasmática, acrossoma e potencial mitocondrial As membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial foram avaliadas pela associação de sondas fluorescentes (Anexo C), descrita por Celeghini et al (2010).…”

“…Figura 14 -Espermatozoides ovinos corados pela técnica da tripla coloração descrita por Celeghini et al (2010) de avaliação das membranas plasmáticas, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial Legenda: A: PIAIA (membrana plasmática intacta, membrana acrossomal intacta, alto potencial de membrana mitocondrial); em B: PIAIB (membrana plasmática intacta, membrana acrossomal intacta, baixo potencial de membrana mitocondrial); em C: PIALA (membrana plasmática intacta, membrana acrossomal lesada, alto potencial de membrana mitocondrial) em D: PIALB (membrana plasmática intacta, membrana acrossomal lesada, baixo potencial de membrana mitocondrial); em E: PLAIA (membrana plasmática lesada, membrana acrossomal intacta, alto potencial de membrana mitocondrial); em F: PLAIB (membrana plasmática lesada, membrana acrossomal intacta, baixo potencial de membrana mitocondrial); em G: PLALA (membrana plasmática lesada, membrana acrossomal lesada, alto potencial de membrana mitocondrial); e em H: PLALB (membrana plasmática lesada, membrana acrossomal lesada, baixo potencial de membrana mitocondrial) Fonte (CELEGHINI et al, 2010) …”