Sensibilidade toxicológica e especificidade do teste de microfixação de complemento na detecção de toxinas botulínicas C e D em meio de cultura e fígado de camundongos

Abstract

No presente estudo pretendeu-se verificar a sensibilidade toxicológica e especificidade do Teste de Microfixação de Complemento (MCF) na detecção de toxinas botulínicas C e D no sobrenadante de cultivos bacterianos e em fígados de camundongos inoculados com doses letais e subletais. As toxinas foram produzidas em meio de cultura Hemoline, tituladas através da determinação da DL50 pelo Bioensaio em Camundongo e diluídas nas concentrações de 10, 1, 0,1, 0,01 e 0,001 DL50. Desta forma, foram utilizadas em dois modelos experimentais, onde foi determinada a sensibilidade toxicológica do MCF no sobrenadante do meio de cultura com as diluições descritas acima e ainda em extratos hepáticos de camundongos com peso corporal de 20g, inoculados com as mesmas diluições. A tentativa de evidenciação das toxinas botulínicas nos extratos hepáticos de camundongos foi realizada através da sua extração após a morte pela administração das doses letais e ainda pelo sacrifício dos animais inoculados com doses subletais, em intervalos de 5 dias. Os resultados evidenciaram uma sensibilidade toxicológica para o MCF de 100% para os dois tipos de toxinas ao nível de 0,01 DL50, quando testados os sobrenadantes de meio de cultura, portanto 100 vezes superior ao Bioensaio em Camundongo. A sensibilidade toxicológica do MCF, quando examinados extratos hepáticos de camundongos inoculados com 1 e 10 DL50 de toxinas botulínicas C e D, foi inferior, com valores de 100, 80, 89 e 72%, respectivamente. Pelo teste foi possível detectar toxinas botulínicas tipos C e D nos extratos hepáticos de camundongos inoculados com doses subletais até 15 dias após a sua inoculação. A especificidade do MCF foi de 88 e 92%, quando testados extratos hepáticos de camundongos sadios, e confrontados com as antitoxinas C e D; e 100% no sobrenadante do meio de cultura. Os resultados apontam para uma possível utilização do teste como importante instrumento de pesquisa e ainda na eventual substituição dos testes in vivo pelas suas implicações éticas e limitações práticas.

Economic impact of an outbreak of botulism in a cattle feedlot

“…The detection of botulinum toxin in liver, ruminal contents or bovine intestinal samples is a gold standard for the confirmation of the disease's diagnosis. However, a negative result obtained using the tests of bioassay and seroneutralization done in mice does not exclude the possibility of botulism, since the levels of botulinum toxin in the animals may be below the threshold for detection through the test (Menegucci et al 1998, Dutra 2001, Heider et al 2001. It is possible realize a presumptive diagnosis of botulism when botulinum toxin is not detected in bovine organ samples due to clinical signs such as consistent disease, ingestion of evidence of the toxin by cattle, and by eliminating other possible causes of similar clinical manifestations to botulism, such as other diseases that affect the nervous system (Silva et al 2016).…”

Jürgen Döbereiner: a life dedicated to science

“…Nesse contexto, com o auxílio da Embrapa e do Departamento de Medicina Veterinária Preventiva da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias da Unesp/Jaboticabal estabeleceu uma parceria com o Dr. Hans-Erich Weiss, veterinário de um instituto de diagnóstico de Heidelberg, Alemanha, que havia adaptado a técnica de fixação de complemento para o diagnóstico do botulismo. Os trabalhos científicos resultantes dessas ações e da equipe foram de grande valor para consolidar uma nova etapa no diagnóstico e controle da doença no país (Dutra et al 1993b, Menegucci et al 1998, Silva et al 1998, Souza et al 2006, Curci et al 2007.…”

“…It is worthwhile mentioning that Dr. Döbereiner enjoyed to relax and recover during weekends at his smallholding "Sítio Porangaba", located in the maritime mountains of the (Dutra et al 1993b, Menegucci et al 1998, Silva et al 1998, Souza et al 2006, Curci et al 2007.…”