Os biossurfactantes são produzidos naturalmente por microrganismos e podem ser sintetizados a partir de substratos renováveis. Possuem alta biodegradabilidade e baixa toxidade, porém a produção de biossurfactante tem sido limitada devido aos altos custos de produção e purificação. O presente trabalho teve como objetivo a produção de biossurfactante por Bacillus subtilis em meio de fermentação a base de resíduos do processamento da casca da laranja nas diluições de 60 % e 40 %, a 37°C durante 24 horas. Foram realizados testes de tensão superficial e índice de emulsão para comprovação da ação tensoativa do biossurfactante produzido. A partir do método do peso da gota, a fermentação realizada com substrato diluído em 40%, obteve uma redução da tensão superficial de 25 %, após 24 horas de fermentação e foi observado o maior índice de emulsificação após 7 horas de fermentação, chegando a 29 % quando utilizado o querosene e 11% com o óleo de soja. Portanto, os resultados mostraram que os resíduos do processamento da casca da laranja é um potencial substrato na produção de biossurfactantes utilizando o Bacillus subtilis.Palavras-chave: Biossurfactante, produção de biossurfactantes, Bacillus subtilis.The biosurfactants are naturally produced by microorganisms and can be synthesized from renewable substrates. They have high biodegradability and low toxicity, however the biosurfactants production has been limited due to high costs of production and purification. This study aimed to produce biosurfactant by Bacillus subtilis at 37°C for 24 hours, using the residue from processing of in orange peel in the dilutions of 60 % and 40 %. Tests were performed of surface tension and index of emulsion for attesting the action tensioactive of the biosurfactant produced. From the drop weight method, the fermentation held 40 % diluted in substrate, obtained a reduction of surface tension of 25 % after 24 hours of fermentation. This fermentation obtained the highest percentage of emulsification after 7 hours of fermentation, reaching 29 % when used kerosene and 11% with soybean oil. Therefore, the results showed that the waste from the processing of orange peel is a potential substrate for the production of biosurfactants using Bacillus subtilis.