Normal and Cut-Off Values of the Cytokinesis-Block Micronucleus Assay on Peripheral Blood Lymphocytes in the Croatian General Population

Abstract

Institut za medicinska istraživanja i medicinu rada, Zagreb, HrvatskaPrimljeno u veljači 2010. Prihvaćeno u ožujku 2010.Mikronukleus (MN) test na limfocitima periferne krvi jedna je od najvažnijih metoda koje se primjenjuju u citogenetičkom nadzoru. Osnovni preduvjet za primjenu nekog testa u svrhu nadzora profesionalno izloženih populacija jest poznavanje normalnih vrijednosti promatranoga biološkog pokazatelja (biomarkera) u kontrolnoj populaciji. Baze podataka na razini opće populacije moraju se redovito obnavljati novim podacima. Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi normalne i granične vrijednosti MN-testa na limfocitima periferne krvi 200 zdravih ispitanika obaju spolova iz opće populacije Republike Hrvatske te ispitati koji čimbenici pridonose spontanom nastanku MN. Na razini istražene populacije utvrđeno je prosječno (6,90±3,32) MN (medijan 7 MN), dok je raspon pojedinačnih vrijednosti iznosio 0 do 18 MN u 1000 binuklearnih stanica. Gornja granična vrijednost dobivena izračunavanjem 95. percentila za cjelokupnu promatranu populaciju iznosi 12,5 MN na 1000 limfocita. Utvrđeno je da na spontani nastanak MN utječu spol, dob i navika pušenja. Žene u prosjeku imaju više vrijednosti svih parametara MN-testa od muškaraca, a u njih je bio i naglašeniji porast vrijednosti citogenetičkog nalaza zbog navike pušenja. Kako su literaturni podaci o utjecaju pušenja cigareta na nastanak MN kontradiktorni, planiran je nastavak istraživanja radi razjašnjavanja utjecaja dnevno utrošenog broja cigareta i ukupnog trajanja pušačkog staža na vrijednosti parametara MN-testa. Usporedba rezultata s literaturnim podacima potvrdila je da su dobivene vrijednosti u skladu s vrijednostima MN-testa zabilježenim na općoj populaciji u drugim svjetskim laboratorijima. Normalne i granične vrijednosti MN-testa utvrđene u ovome istraživanju poslužit će kao osnova za usporedbu i tumačenje nalaza MN-testa u ispitanika izloženih populacija te daljnju nadogradnju laboratorijske baze podataka. KLJUČNE RIJEČI: citogenetički nadzor, dob, nestabilnost genoma, pušenje cigareta, rizik, spol, spontani nastanak mikronukleusaBiološki nadzor (engl. biomonitoring) važan je dio zdravstvenog nadzora nad ispitanicima koji su profesionalno izloženi različitim fizikalnim i kemijskim mutagenima i/ili kancerogenima. Zasniva se na mjerenju (ili utvrđivanju učestalosti) različitih bioloških pokazatelja koji upućuju na najranije, još popravljive biološke učinke, koji prethode pojavi zloćudnih i/ili drugih bolesti. Primjenom biljega izloženosti, učinka i sklonosti (engl. susceptibility) na razini proučavanih populacija možemo utvrditi kakve su razine izloženosti štetnostima na radnim mjestima, je li izloženost rezultirala mjerljivim učinkom (primjerice oštećenjem molekule DNA) te otkriti ispitanike s većom osjetljivosti genoma koji su pod povišenim * svi autori su jednakovrijedni Kopjar N, et al.

Cytogenetic status of healthy children assessed with the alkaline comet assay and the cytokinesis-block micronucleus cytome assay

“…Many studies indicate that the MN frequency in humans progressively increases with age from early adulthood through the rest of life [25,30,[60][61][62][63][64][65]. In contrast, there are some studies that do not find such an increase [66].…”

“…Pareto charts of t-values for the influence of gender and age on alkaline comet-assay parameters (tail length, tail intensity and tail moment) determined in healthy children. Over the past years our laboratory has accumulated many data on cytogenetic biomarkers of general [27][28][29][30] and various exposed human populations [31][32][33][34][35][36]. Nevertheless, these biomarkers have to be re-evaluated occasionally, especially in terms of the general population, in order to establish the upper level of normal variability so that positive effects of exposure can be more easily recognized.…”

A case-control study of genotoxicity endpoints in patients with papillary thyroid cancer

“…The micronucleus test was performed following the guidelines of Fenech and Morley [9] with minor modifications [10]. Blood (0.5 mL) was added to RPMI 1640 medium (Gibco, USA) supplemented with foetal bovine serum (Gibco) and phytohaemagglutinin (Remel Europe Ltd., UK) and incubated at 37 • C and 5% CO 2 for 72 h. After 44 h of culture, cytochalasin-B (Sigma, USA) was added (final concentration 6 g/mL), in order to prevent cytokinesis.…”

The impact of physical activity on the level of chromosome aberrations

“…Studije su pokazale da među polovima postoje različite frekvence mikronukleusa u limfocitima periferne krv i da je frekvence kod žena viša u odnosu na muškarce, što se tumači gubitkom jednog od X hromozoma putem mikronukleusa (Bonassi et al, 2001;Kopjar et al, 2010).…”

“…Fakultet za sport i turizam, Novi Sad, TIMS Acta 9, 49-61 u frekvencama mikronukleusa među polovima (Bonassi et al, 2011 (Ishikawa, Tian & Yamauchi, 2003;Kopjar et al, 2010;Nefic & Handzic, 2013;Bonassi et al, 2011;.…”