Identification of Pythium insidiosum by Nested PCR in Cutaneous Lesions of Brazilian Horses and Rabbits

Botton, Sônia de Ávila; Pereira, Daniela Isabel Brayer; Costa, Mateus Matiuzzi da; Azevedo, María Isabel de; Argenta, Juliana Siqueira; Jesus, Francielli Pantella Kunz de; Alves, Sydney Hartz; Santúrio, Jânio Morais

doi:10.1007/s00284-010-9781-4

Cited by 49 publications

(38 citation statements)

References 18 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…(Pereira et al 2007). Adicionalmente, realizou-se caracterização molecular (PCR) nos tecidos, segundo Botton et al (2011), com primer especíϐico para P. insidiosum.…”

Section: Introductionunclassified

Pitiose em animais de produção no Pantanal Matogrossense

2011

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

Realizou-se, em quatro propriedades rurais no Pantanal Matogrossense, em 2009 e 2010, um estudo clínico e epidemiológico da pitiose em bovinos e equinos. A enfermidade ocorreu predominantemente entre os meses de novembro e março, correspondendo ao período chuvoso na região. A incidência média anual foi de 0,22% e 12,5% em bovinos e equinos, respectivamente. Nos bovinos, a distribuição dos casos ocorreu no ápice das cheias e restringiu-se a novilhas de 6 a 18 meses de idade, nas quais as lesões cutâneas estiveram associadas com edemas perilesionais discretos e claudicações, mas curaram espontaneamente, em um período máximo de 90 dias. Nos equinos, a pitiose acometeu animais de ambos os sexos, de três a oito anos de idade e registrou-se um caso de reinfecção. A doença evoluiu com agravos no sítio lesional, com desenvolvimento de extenso tecido de granulação, kunkersem permeio à lesão, acentuada caquexia e mortes, as quais ocorreram entre três e sete meses após o início dos sinais. A mortalidade média foi 5,88% e a letalidade 45,45%. A confirmação do diagnóstico incluiu ELISA-teste, PCR, histopatologia (HE e Grocott) e isolamento de P. insidiosum. Na área endêmica estudada, a enfermidade não causou impacto econômico em bovinos, a despeito da evolução insatisfatória registrada na maioria dos equinos. Nesse estudo, a incidência de pitiose em equinos foi 57,23 vezes a observada em bovinos, com significância estatística. Apesar das mesmas condições ambientais, tal diferença foi provavelmente associada com susceptibilidade, comportamento e manejo das espécies nos campos alagados.

show abstract

“…(Pereira et al 2007). Adicionalmente, realizou-se caracterização molecular (PCR) nos tecidos, segundo Botton et al (2011), com primer especíϐico para P. insidiosum.…”

Section: Introductionunclassified

Pitiose em animais de produção no Pantanal Matogrossense

2011

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…The current diagnostic modalities, including culture identification (9)(10)(11), serodiagnosis (12)(13)(14)(15)(16)(17)(18)(19)(20)(21)(22), and molecular-based detection (22)(23)(24)(25)(26)(27), are fraught with problems. For example, culture identification is time-consuming and often fails to grow and to identify the organism.…”

mentioning

confidence: 99%

Development of an Anti-Elicitin Antibody-Based Immunohistochemical Assay for Diagnosis of Pythiosis

et al. 2016

View full text Add to dashboard Cite

Pythiosis is an emerging and life-threatening infectious disease of humans and animals living in tropical and subtropical countries and is caused by the fungus-like organism Pythium insidiosum. Antifungals are ineffective against this pathogen. Most patients undergo surgical removal of the infected organ, and many die from advanced infections. Early and accurate diagnosis leads to prompt management and promotes better prognosis for affected patients. Immunohistochemical assays (IHCs) have been developed using rabbit antibodies raised against P. insidiosum crude extract, i.e., culture filtrate antigen (CFA), for the histodiagnosis of pythiosis, but cross-reactivity with pathogenic fungi compromises the diagnostic performance of the IHC. Therefore, there is a need to improve detection specificity. Recently, the elicitin protein, ELI025, was identified in P. insidiosum, but it was not identified in other human pathogens, including true fungi. The ELI025-encoding gene was successfully cloned and expressed as a recombinant protein in Escherichia coli. This study aims to develop a new IHC using the rabbit anti-ELI025 antibody (anti-ELI) and to compare its performance with the previously reported anti-CFA-based IHC. Thirty-eight P. insidiosum histological sections stained positive by anti-ELI-based and anti-CFA-based IHCs indicating 100% detection sensitivity for the two assays. The anti-ELI antibody stained negative for all 49 negative-control sections indicating 100% detection specificity. In contrast, the anti-CFA antibody stained positive for one of the 49 negative controls (a slide prepared from Fusarium-infected tissue) indicating 98% detection specificity. In conclusion, the anti-ELI based IHC is sensitive and specific for the histodiagnosis of pythiosis and is an improvement over the anti-CFA-based assay.

show abstract

“…Previously, SILVA et al (2010) used this technique to confirm the fungal etiology of conidiobolomycosis in ovine. Several authors have suggested the use of molecular biology assays to search DNA sequences of conserved genes in fungal samples, including polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing of intergenic regions (internal transcribed spacer, ITS) and ribosomal DNA units (18S, 5.8S and 28S rDNA) (DE PAULA et al, 2010;BOTTON et al, 2011;SILVEIRA et al, 2013). DE PAULA et al (2010) andSILVEIRA et al (2013) proposed the use of PCR to amplify the 18S rDNA region of pathogenic Conidiobolus.…”

Section: Microscopic Aspectsmentioning

confidence: 99%