Evaluación de una prueba de ELISA con antígeno metabólico de Fasciola hepatica para el diagnóstico de fasciolosis humana en Cajamarca, Perú

Abstract

RESUMENSe obtuvo el antígeno metabólico (antígeno excreción -secreción) de Fasciola hepatica de ovinos infectados de Cajamarca, con una concentración proteica de 1 005 µg/µL, compuesta principalmente por proteínas de peso molecular entre 1,2 y 170 KDa. Se detectaron bandas de 170; 150; 31; 24; 18-14 y 10 kDa. Con este antígeno se desarrolló una prueba de ELISA y se determinó su punto de corte en 0,140. Se evaluó 33 sueros de pacientes con fasciolosis confirmada por visualización de huevos en heces, 177 sueros de pacientes sin fasciolosis provenientes de áreas endémicas de Cajamarca y 88 sueros de pacientes con otras infecciones parasitarias y bacterianas. Se encontró una sensibilidad de 97,0%, especificidad de 96,6%, valor predictivo positivo de 78,1% y valor predictivo negativo de 99,6%. Se encontró reacción cruzada en 9/88 sueros evaluados. Se recomienda la implementación y uso de esta prueba para el diagnóstico de fasciolosis.

Estandarización de ELISA para el diagnóstico de fasciolosis bovina, ovina y humana

“…Sin embargo, se ha dedicado especial atención (lo demuestra el número de trabajos realizados), a la utilización del AE/SFh completo y sus fracciones, pues se ha demostrado mejor rendimiento con este antígeno, lo que está en relación directa con la evidencia de que los productos metabólicos son responsables de una fuerte y temprana respuesta de anticuerpos en los hospedadores, permitiendo diagnosticar infecciones cuando aún no hay daño hepático [15][16][17][18][19][20][21] .…”

“…Sin embargo, la fracción R50 fue seleccionada como óptima debido a los valores superiores de las absorbancias que arrojó en el grupo de los positivos y porque ha sido reportado como un excelente antígeno por varios investigadores 21 , quienes encontraron fracciones que ofrecen alta sensibilidad y especificidad en ELISA y Western blot. En este último, las proteínas de 9, 14 y 27 kDa de la fracción R50 son reconocidas por el 90% al 100% de los sueros positivos y ninguno de los negativos a fasciolosis, ni los sueros positivos para otras helmintiosis, incluida la paragonimiosis.…”

“…Para ello se vienen implementando diversas variantes de la metodología que buscan el mayor rendimiento de la prueba, para la cual se ha utilizado una diversidad de antígenos como: extractos somáticos totales, metabólicos, recombinantes y fracciones purificadas [13][14][15][16][17][18][19][20][21] . Otra metodología empleada en el diagnóstico de la fasciolosis es el Western blot o inmunoelectrotransferencia (EITB), que permite aumentar la especificidad además de evaluar las proteínas inmunodominates [15][16][17][18][19] que pueden ser empleadas como marcadores específicos en pruebas serológicas 6 ; sin embargo, este método no es empleado en la mayoría de laboratorios en los cuales se realiza diagnóstico de la patología, ya que no cuenta con estándares que permitan su rápida masificación.…”

“…Este antígeno ha sido utilizado en diferentes presentaciones y técnicas de inmunodiagnóstico con buenos resultados de sensibilidad (S) y especificidad (E), valores que oscilan entre el 70 y 100% para las dos probabilidades diagnósticas [14][15][16][19][20][21] .…”

“…Como alternativa a la baja sensibilidad del examen coprológico, y respondiendo a la necesidad de contar con una técnica de diagnóstico versátil, este artículo presenta los resultados de la estandarización de un ELISA para fasciolosis en bovinos, ovinos y humanos utilizando el antígeno AgE/SFh en las condiciones locales, comparándola con una técnica desarrollada en la Universidad Central de Venezuela 21 . La estandarización de la misma se efectuó con el propósito de que sirva como herramienta de tamizaje a nivel nacional.…”