ESTABLECIMIENTO DEL SISTEMA DE REGENERACION POR EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA DE Azadirachta indica A. Juss.

Abstract

<p><em>Azadirachta indica</em>, es una planta con múltiples aplicaciones tanto forestal como farmacológica. Por ende, el establecimiento del sistema de cultivo <em>in vitro</em> por embriogénesis somática ofrece diversas y variadas ventajas, tales como obtener plantas altamente productivas en metabolitos. En este estudio, se utilizaron secciones foliares y cotiledonares, inducidas en medios MS (1962) suplementados con: BAP sólo y combinado con ANA/2,4-D, TDZ sólo y con ABA. La regeneración fue con MS sólo o con K + AIA y BAP + AIA. Como resultado se estableció un sistema eficiente con secciones de cotiledones, observándose organogénesis a bajas concentraciones de BAP, mientras a altos niveles de BAP (2,5 mg.L<sup>-1</sup>), así como con TDZ + ABA (0,02 + 1mg.L<sup>-1</sup>) respectivamente favorecieron la embriogénesis somática primaria y secundaria en un 96 % y 71 % respectivamente. La regeneración fue 71 % con MS, mientras que el enraizamiento fue de 86,67 % con MS½, obteniéndose plantas completas a corto plazo. </p><p><strong>ABSTRACT</strong></p><p><em>Azadirachta indica</em>, is a plant with multiple forest and pharmacological application. Therefore, the establishment of <em>in vitro</em> culture system for somatic embryogenesis offers several distinct advantages such as obtaining highly productive plant metabolites. In this study, were used sections cotyledon and leaf, induced on MS medium (1962) supplemented with: BAP alone and combined with NAA / 2,4-D, TDZ alone and ABA. Regeneration was with MS alone or with K + BAP + IAA and IAA. As a result was established an efficient system with cotyledon sections, being observed organogenesis at low concentrations of BAP, while high levels of BAP (2.5 mg.L<sup>-1</sup>) with 96 % and TDZ + ABA (0.02 + 1mg.L<sup>-1</sup>) with 71 %, favoring the primary and secondary somatic embryogenesis. Regeneration was 71 % with MS; rooting was 86.67 % with MS½, presenting whole plants obtained short term.</p><p><strong>RESUMO</strong></p><p><em>Azadirachta indica, </em>é uma planta com várias aplicaçãos florestas e farmacológicas. Por conseguinte, a criação de sistema de cultur<em>a in vitro </em>para a embriogénese somática apresenta várias vantagens, tais como a obtenção de plantas altamente produtivas de metabolitos. Neste estudo, as seções de cotilédones e folhas, induzidas em meios suplementado en MS (1962) con: BAP sozinho e combinado com ANA / 2,4-D, TDZ e ABA sozinho. A regeneração foi apenas com MS ou com K + BAP + IAA e IAA. Como resultado, foi eficiente con seções cotiledones, observados organogênese em baixas concentrações de BAP, en quanto altos níveis de BAP (2,5 mg L-1) e com TDZ + ABA (0,02 + 1mg.L-1) favoreceu a embriogênese somática primária e secundária até 96 % e 71%, respectivamente. Regeneração estava com MS 71 %, en quanto que o enraizamento foi de 86,67 %, com ½ MS produzindo plantas inteiras curto prazo.</p><p><strong><br /></strong></p><p> </p>

Evaluación de la producción in vitro de azadiractina en Neem según el tipo de callo y los agentes químicos

“…A pesar de los escasos estudios morfo anatómicos de los distintos tipos de callo formados en Neem, se ha corroborado recientemente la descripción antes mencionada en los trabajos realizados por Fernández et al [35] y Artigas y Fernández [34][38], donde de manera detallada describen tres tipos de callo: callo E, callo organogénico (caulogénico o de brotes, rizogénico o con raíces) y callo NE.…”

“…Ambos explantes se sembraron en placas de Petri, con medio salino MS solido suplementado con distintos tipos y niveles de reguladores del crecimiento, medios de cultivo óptimos establecidos por Artigas y Fernandez [34] y Fernandez et al [35] en oscuridad continua y temperatura ambiente (25 • C). Para cotiledón se empleó la combinación de 1 mg/L de BAP con 0,4 mg/L de 2,4-D (ácido 2,4diclorofenoxiacetico), mientras que para hoja se utilizó 1 mg/L de BAP con 0,4 mg/L de AIA (ácido índol acético).…”

“…La caracterización histológica y morfológica de los callos embriogénicos (E) y no embriogénicos (NE), se realizó siguiendo el protocolo establecido por Fernández et al [35,36,37] y Artigas y Fernández [34] [38]. Las muestras se fijaron en una solución de formol al 10 % por 24 horas, luego de las cuales, se deshidrataron en una batería de etanol con concentraciones ascendentes (10, 30, 50, 70, 90 y 100 % v/v), manteniéndose 30 min en cada concentración.…”

Establecimiento del sistema de embriogénesis somática en Azadirachta indica A. Juss a partir de suspensiones celulares, acoplado a la producción de azadiractina in vitro

“…Finalmente, se sumergió en una solución de cisteína al 1 % en agua destilada estéril por 30 min, para minimizar la oxidación del embrión cigótico como explante inicial. De este se desarrolla la vitro planta en el medio MS con 0,2 mg/L de BAP (6-N-bencil-aminopurina), en oscuridad continua y temperatura ambiente (25 • C) hasta la diferenciación radical y la apertura de la hojas cotiledonares, estimulando el desarrollo de la misma a 120 µE/m 2 s 1 de iluminación continua, que luego de 2 semanas se obtuvo como explantes definitivos (cotiledón y hoja) para la inducción de callo (embriogénico "E"; no embriogénico "NE") en placas de Petri, con medio MS sólido suplementado con distintos tipos y niveles de reguladores del crecimiento, medios de cultivo óptimos establecidos por Artigas y Fernández [19] y Fernández et al [21] en oscuridad continua y temperatura ambiente (25 • C). Para segmentos foliares se empleó 1 mg/L de BAP con 0,4 mg/L de AIA (ácido índol acético), mientras que para cotiledón se utilizó 1 mg/L de BAP con 0,4 mg/L de 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacetico).…”

“…En relación a la regeneración de plantas in vitro, se ha reportado en medio sólido, ya sea a través de la germinación de semillas [12], así como de explantes como semillas [13], anteras [14], brotes axilares [15], endospermo [16] y embriones cigóticos [17,18]. Las vitro plantas obtenidas se diferencian, ya sea por organogénesis como por embriogénesis somática, tanto primaria como secundaria [19,20,21], distinguiéndose el desarrollo organogénico directo en explantes nodales [22], mientras que mayor es la tasa regenerativa a través de embriones somáticos desarrollados indirectamente de explantes cotiledonares [23].…”