Effect of temperature in reversed phase liquid chromatography

Possibilidades e limitações no uso da temperatura em cromatografia líquida de fase reversa

“…A variação do fator de retenção de um soluto em função da temperatura é descrita pela equação de Van Hoff,3 ) e β é a razão de fases. Solutos pequenos e neutros possuem pequenas entalpias de retenção e apresentam variações pequenas e lineares em seus tempos de retenção em função da temperatura, enquanto solutos como proteínas, 13 polipeptídios 14,15 e bases 16,17 apresentam variações pronunciadas e não lineares em seus tempos de retenção em função da temperatura.…”

“…A viscosidade decresce exponencialmente em função da temperatura, 2,3 assim, o aumento da temperatura permite: a utilização de maiores vazões; o emprego de partículas com menores diâmetros; a utilização de colunas com maior comprimento ou conectadas em série.…”

“…No entanto, a assimetria é frequentemente observada com solutos neutros em FE à base de óxido de zircônio, polímeros ou carbono 32 O aumento na difusão dos solutos com o aumento da temperatura é interessante nestas FE, pois a baixa eficiência obtida com estas é atribuída à pequena difusão dos solutos em seus poros. 33 Adicionalmente as FE à base de óxido de zircônio possuem diversos sítios ácidos que interagem com solutos básicos, resultando em altos fatores de assimetria que podem ser reduzidos pelo aumento da temperatura, como demonstrado por Guillarme et al, 3 onde o aumento da temperatura de 25 a 150 o C resultou na redução dos fatores de assimetria de derivados da cafeína, em uma análise conduzida na coluna Zirchrom-DB-C18 (50 x 4,6 mm, dp 3 μm).…”

“…Os sistemas de HTLC são semelhantes aos sistemas convencionais de HPLC, exceto pela necessidade de pré-aquecer a FM na temperatura do forno para evitar gradientes indesejáveis de temperatura, utilizando uma serpentina de pré-aquecimento entre a coluna e o injetor, e de resfriar a FM antes que ela alcance o detector, quando este não é compatível com altas temperaturas, 3,17,43,55 utilizando um tubo de resfriamento entre a coluna e o detector (Um esquema de um sistema para HTLC é descrito na Figura 3S, material suplementar).…”

“…O comprimento necessário da serpentina entre o injetor e a coluna é uma função da vazão e da temperatura empregada, 3,55 sendo que quanto maior a vazão e a temperatura utilizada maior será o comprimento da serpentina. Por outro lado, quanto maior a serpentina maior será a dispersão e a pressão gerada no sistema, sendo que o mesmo raciocínio se aplica ao tubo de resfriamento.…”